簇毛麦金属转运蛋白基因Hv-FP3克隆及其功能初步分析.docVIP

  簇毛麦金属转运蛋白基因 Hv-FP3 克隆及其 功能初步分析# 李颖波1，王慰1，祝燕飞1，费菲1，曹爱忠1，王海燕1，邢莉萍1，陈炜1，王宗宽 5 1 ，程江月1，谢旗2，王秀娥1** （1. 南京农业大学细胞遗传所，作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京 210095； 2. 中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京，100101） 摘要：白粉病是小麦重要的病害之一，小麦近缘物种簇毛麦表现高抗白粉病，携带抗白粉病 基因 Pm21。本实验室在前期研究中利用基因芯片杂交结合 cDNA 文库筛选在簇毛麦中克隆 10 15 20 25 30 35 了一个编码 E3 连接酶的基因 Hv-CMPG，证明该基因在抗白粉病中发挥重要的正调控作 用。为了进一步阐明簇毛麦抗白粉病的分子机制，本研究在构建簇毛麦酵母双杂交文库的 基础上，通过筛选发现一个与 Hv-CMPG 互作的金属转运蛋白基因，并在簇毛麦中克隆获 得该基因全长，命名为 Hv-FP3（已申请专利，专利申请号：201210574738X）。实时定量 RT-PCR 结果表明，该基因在白粉菌诱导的簇毛麦叶片中上调表达，并且其表达受 ET 诱导 上调；亚细胞定位结果显示，该基因定位于细胞核和细胞膜上；瞬间表达结果表明，在扬 麦 158 叶片中超量表达 Hv-FP3 后，白粉菌的吸器指数明显下降；转基因结果表明，在中感 小麦白粉病的小麦品种扬麦 158 中，过量表达 Hv-FP3 的转基因植株高抗小麦白粉病。综合 上述结果，Hv-FP3 基因参与簇毛麦的白粉病反应，并发挥重要作用。 关键词：小麦；白粉病；酵母双杂交；金属转运蛋白 中图分类号：S512.S332.2 Cloning and preliminary functional analysis of a metal transporter gene Hv-FP3 from Haynaldia villosa L. LI Yingbo1, WANG Wei1, ZHU Yanfei1, FEI Fei1, CAO Aizhong1, WANG Haiyan1, XING Liping1, CHEN Wei1, WANG Zongkuan1, CHENG Jiangyue1, XIE Qie2, WANG Xiue1 (1. National Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement, Cytogenetics Institute,Nanjing Agricultural University, NanJing 210095; 2. Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101) Abstract: Powdery mildew is one of the most serious diseases threaten wheat production. Haynaldia villosa L., a wheat relative species, shows high powdery mildew resistance and confers the resistance gene Pm21. In our previous study, by using the Barley GeneChip microarray and cDNA library screening, a Hv CMPG gene encoding an E3 ligase has been cloned and was found to play an important role in the defense response to the powdery mildew disease. For furthee elucidating the molecular mechanism, a yeast two-hybrid library of H. villosa was constructed and used to screen the interact genes of Hv CMPG. A metal transporter gene was found to be interact with the Hv CMPG, and the full length was cloned from H. villosa and was designated as Hv-FP3 (Patent application number: 基