不同物种NRDR表达载体构建及维生素K3催化活性检测.docVIP

  不同物种 NRDR 表达载体构建及维生素 K3 催化活性检测# 梁斌，宋旭红，黄东阳** 5 10 （汕头大学医学院细胞生物学教研室，广东 汕头 515041） 摘要：目的：构建体外表达载体，检测不同物种 NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR） 的维生素 K3 催化活性。方法：构建人、猪、兔、大鼠、小鼠 NRDR 的原核表达载体 Human pDEST17-NRDR、Pig pDEST17-NRDR、Rabbit pDEST17-NRDR、Rat pDEST17-NRDR、Mouse pDEST17-NRDR，诱导表达后检测其对维生素 K3 催化活性。结果：不同物种 NRDR 对维 生素 K3 的催化活性差别比较大，其中猪 NRDR 的催化效能（kcat/Km）最高，其次是兔 NRDR， 大鼠和小鼠 NRDR 催化活性相对较低。结论：猪 NRDR 可能对结构类似维生素 K3 的醌类 化合物具有较强的还原活性。 关键词：NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶；酶活力；维生素 K3 中图分类号： Q291，Q71 15 Expressiion and catalytic activity analysis of NRDR derived from different species LIANG Bin, SONG Xuhong, HUANG Dongyang (Department of Cell Biology, Shantou University Medical School, GuangDong ShanTou 515041) 20 25 30 35 40 Abstract: Objective: To construct the expression vectors of Hum pDEST17-NRDR, Pig pDEST17- NRDR, Rabbit pDEST17-NRDR, Rat pDEST17-NRDR, and Mouse pDEST17-NRDR, and determine their catalytic activity of menadione. Methods: The prokaryotic expression vectors of NRDRs derived from different species were constructed. The catalytic activities of the NRDRs towards menadione were detected. Results: The recombinant NRDRs could efficiently catalyze the reduction of menadione, and pig NRDR exhibited higher catalytic efficiency. Conclusion: To catalyze efficiently the reduction of quinonoids such as menadione may be the new function of NRDR. Keywords: NRDR; catalytic activity; menadione 0 引言 NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）是从兔肝中发现并纯化的一种氧化还原 酶[1]，它在哺乳动物的组织中普遍表达。兔肝 NRDR 具有极强的视黄醛还原活性[1,2]。研 究还证实，NRDR 在狗肝、猪肝、鼠肝中作为羰基还原酶催化芳香酮类、α-双羰基化合物 以及视黄醛；人 NRDR 可以有效催化带苯环的α-双羰基化合物和某些羟基类固醇激素[3-6]。 我们的前期研究结果也显示：人 NRDR 具有较强的还原 Benzil（一种广泛使用的α-双羰基 化合物）的作用，而 NRDR 的选择性剪接亚型 NRDRB1 蛋白则具有较 NRDR 更强的代谢 Benzil 的活性[7]。K 族维生素都含有萘醌环，在萘醌环的 1,4 号碳原子上分别带有一个酮基， 有成为 NRDR 潜在底物的可能性。我们构建了人、猪、大鼠、小鼠 NRDR 的原核表达载体， 诱导表达不同物种的 NRDR 融合蛋白，研究其对维生素 K3 催化反应的酶动力学，分析比较 不同物种 NRDR 对维生素 K3 催化能力的差异，为深入研究 NRDR 的生理功能奠定基础。 基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20094402110003）；高等学校博士学科点新教师基金 （20094402120005） 作者简介：梁斌，（1969-），男，博士，主要研究方向：细胞代谢分子生物学。 通信联系人：黄东阳，（1957-），男，博士