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农业生物技术学报， 年， 第 卷， 第 期， 第 页
2011 19 2 206~213
JournalofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.2,206~213
研究论文
AnArticle
家蚕真核细胞翻译起始因子 BmeIF4E 基因的克隆、 表达及功能分析
( )
于威 1,2* 韩剑秋 1,2 张耀洲 1,2
1 310018 2 310018
浙江理工大学生物化学研究所， 杭州 ； 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室， 杭州
* yuwei@
通讯作者，
摘 要 本研究从自建的家蚕 Bombyx mori 蛹期 ( ) cDNA 文库中筛选到一条 cDNA序列， 发现其在序列和结
构上与其他物种的真核细胞翻译起始因子 4E 基因 BmeIF4E 具有较高的相似性， 推测可能是家蚕 eIF4E 基
( )
因， 将该序列命名为 BmeIF4E ， 登录号为 。为研究 BmeIF4E 的生物学功能， 将该基因插
GenBank DN443192
入原核表达载体 中， 构建重组质粒 BmeIF4E ， 转化感受态细胞 ， 诱
pET28a(+) pET28a(+) BL21(DE3) IPTG
导表达并纯化该重组蛋白，制备多克隆抗体。利用家蚕 Bm5 细胞进行亚细胞定位研究结果表明，BmeIF4E
既存在于细胞质中也存在于细胞核中。荧光定量 和 分析结果表明， 在不同组织及发育时
PCR Westernblot
期该基因的表达有差异， 在各组织中 BmeIF4E 表达量从高到底依次是马氏管、 表皮、 脂肪体、 气管、 卵巢、 中
肠、 头和丝腺； 在卵、 幼虫、 蛹和蛾 4 个发育时期中， 蛾中的表达量最高， 其次是蛹， 再次是五龄幼虫， 而在卵
中表达量较低。以该基因的 为模板体外转录 ， 脂质体法转染 细胞， 后提取细胞总蛋白
ORF dsRNA Bm5 72h
作 Westernblot 检测 RNA干扰情况， 发现 BmeIF4E 基因被干扰后， 总蛋白中目的蛋白含量明显低于阴性对
照组。 法检测结果表明， 干扰后细胞活力也明显下降。研究结果提示，BmeIF4E 作为一种重要的管家基
MTT
因， 在家蚕的整个生命周期中均有表达， 起着十分重要的作用。
关键词 家蚕，BmeIF4E ， 原核表达， 亚细胞定位，
RNAi
Cloning, Expression and Function A
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