生化分离技术典型产品的分离工艺.pptVIP

目前维生素C的生产主要采用两步发酵法。即以葡萄糖为原料，经高压催化氢化制备山梨醇，然后以山梨醇为原料经两步微生物（黑醋菌、假单孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合菌株）发酵制备2-酮基-L-古龙酸，再将此酸酸（或碱）转化等工序制得粗品维生素C，粗品维生素C经精制得成品Vc。下面重点介绍发酵后的分离工艺过程。 一、 维生素C的分离原理 1、2-酮基-L-古龙酸的分离 山梨醇经两步微生物发酵主要生成2-酮基-L-古龙酸，使发酵液酸度提高，为了保证产酸正常进行，必须定期滴加灭菌的碳酸钠溶液调pH值，使pH值保持7.0左右，这样发酵终点所得溶液是含古龙酸钠及少量古龙酸的发酵液。在发酵终点时，用于发酵的芽孢杆菌菌体已逐步自溶成碎片，使大量的菌体蛋白溶入发酵液中。因此，发酵液中除了含有一定量的2-酮基-L-古龙酸钠及2-酮基-L-古龙酸外，还含有大量的菌体蛋白。要将2-酮基-L-古龙酸钠从发酵液中分离提取出来，必须先除去菌体蛋白。除去菌体蛋白的发酵液中含2-酮基-L-古龙酸钠及2-酮基-L-古龙酸，由于2-酮基-L-古龙酸钠（能解离为阴、阳离子），用732阳离子交换树脂进行交换可去掉其中Na+而得2-酮基-L-古龙酸稀液。高温下2-酮基-L-古龙酸不稳定，所以为了浓缩古龙酸溶液使其达到一定浓度，可采用减压浓缩的方法。由于低温下2-酮基-L-古龙酸溶解度较小，所以可经冷却结晶得2-酮基-L-古龙酸晶体，从而实现了从发酵液中提取分离2-酮基-L-古龙酸的操作过程。 2．粗品维生素C的分离 分离得到的2-酮基-L-古龙酸，采取适当的方法可转化为维生素C，将维生素C的溶液进行减压蒸发浓缩，然后冷却进行结晶，离心分离，得粗品维生素C。 3．粗维生素C的精制 粗品维生素C经真空干燥后，再溶解，脱色，进行重结晶，对晶体再一次进行真空干燥，便可得到精制维生素C。 二、维生素C的分离工艺及操作 1. 2-酮基-L-古龙酸的分离工艺及操作 （1）离子交换 ①将发酵液冷却后用盐酸酸化，调至菌体蛋白等电点，使菌体蛋白沉淀。静置数小时后去掉菌体蛋白，将酸化上清液以(2～3)m3/h的流速压入一次阳离子交换柱进行离子交换。或将发酵液加入至循环槽，经冷却调节pH值后，用泵打入微滤膜、超滤膜过滤器内除去菌体及蛋白类物质后，将滤液压入阳离子交换柱内进行离子交换。当回流到pH3.5时，开始收集交换液，控制流出液的pH值，以防树脂饱和，发酵液交换完后，用纯水洗柱，至流出液古龙酸含量低于1mg/ml以下为止。当流出液达到一定pH值时，则更换树脂进行交换，原树脂进行再生处理。 ② 将经过一次交换后的流出液和洗液合并，在加热罐内调pH至蛋白质等电点，然后加热至70℃左右，加0.3%左右的活性炭，升温至90℃～95℃后再保温(10～15)min，使菌体蛋白凝结。停搅拌，快速冷却，高速离心过滤得清液。 ③将酸性上清液打入二次交换柱进行离子交换，至流出液的pH1.5时，开始收集交换液，控制流出液pH1.5～1.7，交换完毕，洗柱至流出液古龙酸含量在1mg/ml以下为止。若pH1.7时，需更换交换柱。 （2）减压浓缩结晶 先将二次交换液进行一级真空浓缩，温度45℃，至浓缩液的相对密度达1.2左右，即可出料。接着，又在同样条件下进行二级浓缩，然后加入少量乙醇，冷却结晶，甩滤并用冰乙醇洗涤，得2-酮基-L-古龙酸。 如果以后工序使用碱转化，则需将2-酮基-L-古龙酸进行真空干燥，以除去部分水分。 2．酸转化工艺及操作 按配料比为2-酮基-L-古龙酸：38%盐酸：丙酮=1：0.4（W/ W）：0.3（W/ W）进行工艺配置。先将丙酮及一半古龙酸加入转化罐搅拌，再加入盐酸和余下的古龙酸。待罐夹层满水后开蒸汽阀，缓慢升温至30~38℃关汽，自然升温至52~54℃，保温约5h，反应到达高潮，结晶析出，罐内温度稍有上升，最高可达59℃，严格控制温度不能超过60℃。反应过程中为防止泡沫过多引起冒罐，可在投料时加入一定量的泡敌作消泡剂。剧烈反应期后，维持温度在50~52℃，至总保温时间为20h。开冷却水降温1h，加入适量乙醇，冷却至-2℃，放料。甩滤0.5h后用冰乙醇洗涤，甩干，再洗涤，甩干3h左右，干燥后得粗维C。 3．碱转化工艺及操作 ①酯化 将甲醇、浓硫酸和干燥的古龙酸加入罐内，搅拌并加热，使温度为66~68℃，反应4h左右即为酯化终点。然后冷却，加入碳酸氢钠，再升温至66℃左右，回流10h后即为转化终点。再冷却至0℃，离心分离，取出维生素C钠盐，结晶母液经过滤后送往精馏岗位回收甲醇。 ②酸化 将维生素C钠盐溶于水（或交换洗液、精制岗位的结晶母液）配成溶液，注入装填有磺酸型