DNA与金属配合物（主要为抗癌药物）的相互作用的研究.pdfVIP

光谱法在DNA与金 属配合物 相互作用的研究方 面的应用 报告人：周智（化学2班） 一 选题的由来与意义 20世纪80年代中期，研究发现金属配 2+ 3+ 合物与ＤＮＡ的作用时,发现Ｒｕ 、Ｃｏ 的八面手性金属配合物具有识别ＤＮＡ二 级结构的能力, 从而发展了一种能识别Ｂ 型ＤＮＡ的手性配合物探针. 杨频等人用ＥＢ作探针研究了Ｆｅ( ｐ ｈｅｎ) Ｃｌ·6Ｈ Ｏ等手性金属配合物与 3 2 2 ＤＮＡ的作用机理。 近年发现，一些金属络合物如金属席夫 碱,在氧化剂存在的条件下, 能够断裂或者键 合ＤＮＡ。 席夫碱及金属席夫碱化合物是一类抗 癌药物,研究抗癌药物与ＤＮＡ的相互作用 机理, 对选择核酸酶及抗癌药物的合成具 有重要意义。 二 主要研究手段 1.紫外光谱法 双链DNA分子由于含有芳香性碱基和磷酸 根，其紫外光谱在260nm 附近有1强吸收峰。 DNA 的碱基是很多药物与DNA结合的位点。 结合药物后，DNA 的上述特征吸收峰会发生位 移。 金属席夫碱的结构图 对于Mn 席夫碱，随着 DNA 的加入， 其吸收光谱发 生明显的减色 效应，同时其 234nm处的吸 收峰有2nm 的 微小紫移。 2. 荧光光谱法 （1）用溴化乙啶作荧光试剂的原理 溴化乙啶(EthBr)能插入双链DNA 的碱基之 间与DNA发生专一作用，因此其本身荧光强度被 大大增强，达100倍，成为测定DNA及各种性质 的灵敏试剂。 如果某种化合物能与DNA发生类似溴化 乙啶与DNA这种作用方式的反应，就会竞争 溴化乙啶与DNA体系的荧光，跟踪这一体系 的荧光变化，可以判断化合物是否与DNA发 生作用。 （2 ）EB和化合物的竞争实验 EB与DNA发生嵌入作用使其荧光强度 大增，而Mn席夫碱与DNA发生类似作用， 两者竞争结合位点，减弱EB-DNA体系的荧 光。通常以c(compl)/c(DNA)100为限，荧 光值减弱50%作为化合物是否与DNA作用 的判据。 由左图可知 随Mn席夫碱浓 度增加，EB- DNA体系荧光强 度减弱，当增至 c(compl)/c(DNA) =31.84时，体系 的荧光强度已降 至48.5%，表明 Mn席夫碱嵌入 到了DNA双链之 间。 右图比较 了几种席夫碱 与DNA相互作 用的强弱，其 中作用最强的 为Co(II)席夫 碱，最弱为Zn 席夫碱. （3 ）KI 的猝灭实验 一些物质（如卤素离子、硝基化合物、重 金属离子等等）可使荧光猝灭，称为荧光猝 灭作用。KI为常用的荧光猝灭剂。 通过在有CTDNA （小牛胸腺的DNA)和无 CTDNA存在的情况下，KI对Mn席夫碱猝灭 情况的不同，可进一步论证Mn席夫碱与DNA 的嵌入作用。 由左图知 Mn席夫碱的 荧光程度随KI 的增加快速降 低，没有DNA 存在时比有 DNA存在时降 得更快，表明 Mn席夫碱嵌 入DNA双链 中，因受到磷 酸基团保护从 而使荧光猝灭 变慢。 （4 ）温度的影响 温度对物质的荧光度有一定影响，一般来 说温度越高，荧光强度越低，对Mn席夫碱而 言随温度升高荧光强度降低，但在Mn席夫碱- DNA体系中，随温度上升，体系的荧光强度先 升后降。在较低温度下，DNA双链堆积较为紧 密，Mn席夫碱嵌入碱