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有关水质细菌学检验的讨论 姜大栋　谌启鹏 【中图分类号】Ｒ３７　　　　【文献标识码】Ａ　　　　【文章编号】１６７２－３７８３（２０１１）０８－０３９０－０１ 【摘要】本文对水介质中细菌总数和大肠杆菌指数几种新的检测方法的原理及其在环境领域中的应用进行了简述和分析。 【关键词】细菌总数；大肠杆菌指数；检测方法 　　水质细菌学检验是培水和污水水质分析工作中的一项重要指标。作为水 异性抗原的目的。应用此法从病人及与此相关的奶牛场奶牛的粪便中分离出 质日常检测的七项指标（色度、浊度、细菌总数、大肠菌群、余氯、铁、锰）之一的 多株山梨醇阳性的０１５７：Ｈ７大肠杆菌。Ｙｕ利用免疫磁珠技术结合荧光免疫法 细菌总数和大肠杆菌指数，能非常直观地反映水被细菌污染的程度。作为水质 研究环境水样中的细菌和有毒物质的快速检测，还对该法和电化学发光技术进 卫生学检测的两个常用的微生物基础指标，细菌总数和大肠杆菌指数在环境水 行了比较，结果表明该法虽然敏感度不如后者，但是却更直接更方便。 质监测中起着非常重要的指标意义。 ２．４　荧光免疫测定技术：荧光免疫测定（ＦＬｕｏｒｅｓｃｅｎｔｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＦＩＡ）是 １　水质中几种新的细菌总数的检测方法 以荧光素作为标记物，将免疫反应的特异性与灵敏性结合，通过荧光分光光度 １．１　ＴＴＣ营养琼脂法：该方法的操作与平皿计数法完全相同，仅将培养基 计测量荧光强度，推算待测物质的浓度。这种技术已被广泛应用。针对其容易 成份稍作改动，添加了ＴＴＣ染色剂。由于菌落染上红色，使原本与培养基颜色 被高背景干扰的缺点，时间分辨荧光免疫分析（ＴＲＦＩＡ）技术得到了快速发展。 较难区分的细小菌落变得很容易辨认，提高了计数率。 该法超过了放射性同位素标记所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便， １．２　膜过滤法：该方法通过抽滤系统将细菌截留在滤膜上，再将滤膜放置 储存时间长，无放射性污染，检测重复性好，操作流程短，标准曲线范围宽，应用 在已含有培养基的无菌培养皿中培养。其培养基的形式有以下几种：（１）自配 范围广泛等优点，是一种新型的免疫标记分析手段，具有广泛的发展空间。 培养基后分装入平皿；（２）现成的已分装入滴瓶或安瓿瓶的培养液，使用时在平 ２．５　化学发光免疫分析技术：化学发光免疫分析（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ 皿中先放人无菌吸收垫，再滴加培养液：（３）与培养皿配套供应的干粉状培养 ｉｍｍｎｏａｓｓａｖ，ＣＬＩＡ）利用化学发光物质作为标记物，将具有高灵敏度的化学发光 基，在检测时可用少量无菌水湿润。膜过滤法中一般选择孔径大小为０．２２ｍ 测定技术与高特异性的免疫反应相结合进行检测。化学发光免疫分析技术目 μ 的滤膜可以将所有的细菌截获。 前在环境领域中应用不多。 １．３　快速荧光法：该方法的原理是通过试剂促进活菌释放出较多的ＡＴＰ ２．６　免疫胶体金标记技术：免疫胶体金标记技术（Ｉｍｍｎｕｎｏｃｏｌｌｏｉｄａｌ—ｇｏｌｄｔ 活性物质，当活性物质与荧光酶反应时会发出荧光。对荧光计数就能得到细菌 ｅｃｈｉｑｕｅ，ＩＣＧＴ）是以胶体金作为示踪标志物，应用于抗原抗体的一种新型免疫标 总数，该方法只需要短暂培养。 记技术。该方法是中华人民共和国卫生部颁布的“关于全国肠出血性大肠杆菌 ２　水质中大肠杆菌指数的检测方法 ０１５７：Ｈ７感染性腹泻应急处理预案”中的指定方法。该法具有快速反应的特 目前，国际上公认的大肠菌群标准检测方法以多管发酵法和滤膜法为主。 点，但只能作为大肠杆菌的定性或半定量检测，较适用于一些致病性大肠杆菌 我国在水和食品卫生检验标准中规定的大肠菌群数的检测也是多管发酵法与 的检测。 滤膜法。但是其检测周期长，操作繁琐，难以适应污染源快速诊断的需要。 ２．７　联用分析方法：将多种方法相结合从而实现自动化操作和精确控制， ２．１　ＤＮＡ探针技术：ＤＮＡ探针技术是用特异性的ＤＮＡ探针进行大肠杆 可以大幅度地提高灵敏度。目前各种联用分析方