黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化.pdfVIP

维普资讯 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月 ·1233． · 药材与资源 · 黄连药材 DNA提取及 RAPD反应体系的优化 陈大霞 ，李隆云 ，钱 敏 ，鲁 成 (1．重庆市中药研究院，重庆 400065；2．西南农业大学 蚕桑学重点实验室，重庆 400716) 摘 要 ：目的 探索黄连药材 DNA 的提取并对其RAPD反应体系进行优化 。方法 采用 目前较为流行的苯酚法、 CTAB法、高盐低 pH值法 ，通过 电泳、紫外分光光度仪检测及 RAPD扩增效果确定黄连药材基 因组 DNA提取的 最佳方法 。结果 CTAB法为黄连药材基 因组 DNA提取的最佳方法 ，建立 了适合黄连药材 的RAPD反应体系：25 L体系中内含 1×PCRbuffer、2mmol／LMg 、IO0t150~／mol／LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶 。结 论 CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材 的RAPD分析 。 关键词 ：黄连药材；基因组 DNA提取 ；RAPD；反应体系 中圈分类号 ：R282．7 文献标识码 ：A 文章编号 ：0253—2670(2006)08—1233—05 DNA Extractionfrom RhizomaCoptidusandoptimizationOfRAPD reaction system CHEN Da—xia，LILong—yun ，QIAN Min ，LU Cheng (1．ChongqingAcademyofChineseMateriaM edica，Chongqing400065。Chinal2．TheKeySericulturalLaboratory ofSouthwestAgriculturalUniversity，Chongqing400716。China) Abstract：Objective TostudythegenomicDNAextractionfrom RhizomaCoptidusandoptimization ofRAPD reactionsystem．M ethods Differentmethods，i．e．phenolmethod，CTAB method，low pH extractionmedium withhighsalt，wereused togenomicDNA extractfrom RhizomaCoptidus．TheDNA samples obtained by the above methods were tested by agarose gelelectrophoresis and ultraviolet spectrometer．Results CTAB Methodwasconsideredtobefluoptimaltechnique．Basedonthegenomic DNA extractedbyCTAB method，flreaction system suitableforRhizomaCoptiduswasestablished．that is，25 Lamplificationreactionssystem containing 1×PCR buffer，2mmol／LMg抖，100— 150~／mol／L dNTP，20ngprimer，40ngtemplateDNA，and1U TaqDNA polymerase．Conclusion CTAB Method andRAPD reactionsystem canbeusedtoRAPD analysisinRhizomaCoptidus． Keywords：RhizomaCoptidus；genomicDNA extraction；RAPD；reactionsystem 对于新鲜材料而言 ，DNA的提取 已有较为成熟 此在对黄连药材进行 RAPD分析时，完