壳聚糖-磷酸钙材料复合BMSCs、bFGF及rhBMP- 2在兔腰椎融合中的实验研究.pdfVIP

暨南大学硕士论文 壳聚糖-磷酸钙材料复合 BMSCs 、bFGF 及 rhBMP- 2 在兔腰椎融合中的实验研究 壳聚糖-磷酸钙材料复合 BMSCs、bFGF 及 rhBMP- 2 在兔腰 椎融合中的实验研究 中文摘要 目的：探讨壳聚糖(Chitosan ，CS)-磷酸钙(Calcium Phosphate Cement,CPC) 材料与 Sprague-Dawley (SD)大鼠骨髓基质干细胞（Bone mesenchymal stem cells, BMSCs ） 的体外细胞相容性。将 CS-CPC 材料、重组人骨形态发生蛋白 2 （recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2 ）、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrolast growth factor, bFGF)及 SD 大鼠 BMSCs 复合，在体外构建组织工程骨向成骨诱导后 植入动物体内，评价复合材料在兔椎间融合的效果。 方法：1、应用骨组织工程原理，分离培养 SD 大鼠 BMSCs ，将骨髓间充质干细 胞(BMSCs)进行体外扩增，相差显微镜观察细胞形态，对细胞表面抗原、细胞活力 及周期进行检测。2、制备壳聚糖-磷酸钙（CS- CPC ）支架，再将CS-CPC 支架放入 rhBMP-2 ，bFGF 溶液中浸泡,真空抽吸后，冷冻干燥。测量 CS-CPC 支架的孔隙率 及抗压强度, 扫描电镜观察其超微结构。3、取生长良好的 P3 代 BMSCs 种植在附和 rhBMP-2 ，bFGF 的 CS-CPC 材料上，体外构成组织工程骨，加入成骨诱导液，观 察种子细胞在复合材料上的生长情况，通过生长曲线、ALP 及茜素红染色、扫描电 镜观察，综合评价材料与细胞的相容性。4、将 CS-CPC/rhBMP-2，bFGF 及 BMSCs 复合物行兔前路腰椎椎间融合术（anterior lumbar intervertebral fusion，ALIF ），A 组 植入自体松质骨，B 组植入 CS-CPC/rhBMP-2 ，bFGF 的复合材料，C 组植入 CS-CPC/rhBMP-2，bFGF ，BMSCs 的材料，D 组不植入任何材料。术后 4 、8、12 周进行标本的大体观察、影像学、组织学及生物力学等手段检测其成骨效果。 结果：BMSCs 可在体外分离扩增，表达 CD29、CD44，不表达 CD45，细胞形 态为长梭形。制备的复合 rhBMP-2 及 bFGF 后的 CS-CPC 支架的空隙率为 89%，压 缩弹性模量为 21 MPa 。扫描电镜结果显示支架材料内部为多孔结构，孔径超过 100μm 。细胞在材料上良好生长，材料与BMSCs 有较好的相容性。兔腰椎椎间融合 I 暨南大学硕士论文 壳聚糖-磷酸钙材料复合 BMSCs 、bFGF 及 rhBMP- 2 在兔腰椎融合中的实验研究 后 3 个月，A 、C 组显示有椎体融合。两组间融合节段的生物力学强度大致相同。B 组部分融合，D 组无融合迹象。术后 4 、8、12 周实验组与实验对照组放射学检查评 价新骨生成有显著性差异( P 0.05) 。实验组兔腰椎体完全融合，对照组部分融合， 空白不能融合。 结论： 1 ．BMSCs 可在体外长期、稳定培养；是理想的组织工程种子细胞； CS-CPC/rhBMP-2，bFGF 与 BMSCs 有良好的生物相容性。 2 、CS-CPC/rhBMP-2，bFGF复合材料具有良好的孔隙率、抗压强度及孔径。 3、CS-CPC/rhBMP-2，bFGF及BMSCs复合物在兔腰椎椎间融合中表现出良好的融 合效果，有望成为脊柱融合术骨融合材料的替代材料。 关键词：壳聚糖-磷酸钙 细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 脊柱融合 骨组织工程 The study is to observe the effects of Chitosan(CS) -Calcium Phosphate Cement(CPC)/rhBMP-2,bFGF with as a composite