全小肠切除大鼠结肠代偿差异蛋白质表达的实验研究.pdfVIP

暨南大学硕士论文 全小肠切除大鼠结肠代偿差异蛋白质表达的实验研究 全小肠切除大鼠结肠代偿差异蛋白质表达的实验研究 摘 要 目的：探讨全小肠切除大鼠结肠结肠代偿的分子生物学机制，通过蛋白质组学技 术分析结肠代偿差异蛋白质的表达。 方法：SD 雄性大鼠 (30 只)随机分为 3 组，超短肠组 (10 只)：制作切 90%-95% 小肠的超短肠大鼠；假手术组(10 只) ：给予小肠横断后再吻合手术； 正常对照组(10只)：正常大鼠。超短肠组、假手术组术后给予肠内营养 (EN) 支持，正常对照组大鼠用相同的方法喂养。三组均喂养 21d 后在光 学显微镜下观察结肠粘膜厚度、皱襞高度。并提取结肠粘膜蛋白质，经 过双向凝胶电泳 建立各组蛋白质双向电泳图谱，用 ImageMaster 2DPlatinum 图象分析软件分析寻找差异蛋白质点,结合质谱技术鉴定差 异表达蛋白，并通过查询生物信息数据库对表达差异蛋白的进行功能分 类和初步分析。 结果：1.全小肠切除后大鼠结肠形态学出现显著的代偿性改变，表现为粘膜厚 度增加，皱襞增高。①超短肠组与正常对照组相比，粘膜厚度明显增加 （302.1 士 16.9µm vs273.7 士 16.0µm），差异有统计学意义。假手术组与 对照组相比，差异无统计学意义（276.6 士 19.1µm vs273.7 士 16.0µm）。 ②超短肠组结肠皱襞高度高于对照组 （998.4 士 81. 2µm vs 883.4 士 39.0µm ），差异有统计学意义(P0.05），假手术组与对照组相比（893.7 士 20.2µm vs 883.4 士 39.0µm ）差异无统计学意义 (P0.05）。 2.利用双向凝胶电泳技术成功得到超短肠组、正常大鼠组和假手术组结 肠粘膜组织的双向凝胶电泳图谱。经 ImageMaster2D Platinum 软件分析 三组结肠粘膜蛋白表达差异，结果显示①超短肠组与正常大鼠组比较有 141 个差异蛋白质点表达，49 个蛋白质点表达下调且大于 2 倍，有 92 个蛋白质点表达上调且大于 2 倍的，其中在超短肠组出现而正常大鼠组 未出现的蛋白质点有 49 个。②超短肠组与假手术组比较有 133 个差异蛋 I 暨南大学硕士论文 全小肠切除大鼠结肠代偿差异蛋白质表达的实验研究 白质点表达，30 个蛋白质点表达下调且大于 2 倍,有 103 个蛋白质点表 达上调且大于 2 倍，其中在超短肠组出现而假手术组未出现的蛋白质点 有 53 个。③比较所得的两组差异蛋白质,共同的差异蛋白质点 47 个，17 个蛋白质点表达下调且大于 2 倍,有 30 个蛋白质点表达上调且大于 2 倍，其中在超短肠组出现而其他两组未出现的蛋白质点有 14。 3．在共同的蛋白质差异点中选取 8 个上调且大于 2 倍差异的蛋白点进 行质谱鉴定，鉴定获得 8 种差异蛋白质，包括蛋白质二硫键异构酶 A3, 磷 酸甘油酸激酶同工酶 1, 丙酮酸激酶 M1/M2, 醇脱氢酶 3, 线粒体核糖体 蛋白 L12, 胰甘油三酯脂酶, Hnrph1 及 Lambda-crystallin homolog。 并通过生物信息学分析发现这些蛋白质参与糖和脂肪代谢，蛋白质合成， 氧化还原及具有分子伴侣功能等。 结论：全小肠切除后大鼠结肠发生了明显的形态学代偿性增生.与 USBS 大鼠结 肠代偿有关的差异蛋白质包括蛋白质二硫键异构酶A3, 磷酸甘油酸激酶 同工酶 1, 丙酮酸激酶 M1/M2, 醇脱氢酶 3, 线粒体核糖体蛋白 L12, 胰 甘油三酯脂酶, Hnrph1 及 Lambda-crystallin homolog,参与糖和脂肪代