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蛋白质组技术的研究进展 大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内， 一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995 年，流感嗜血 50 杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近 个细菌的基因组序 列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多 DNA 序列信息仅提供相关基因组的结构和功能. 然而，对基因产物（mRNA 和 蛋白质）的理解是理解细胞生物学的一个不可缺少的部分. DNA 序列信息不能 预测：1)基因表达产物是否或何时被翻译；2)基因产物的相应含量；3)翻译后修 饰的程度；4)基因剔除或过表达的影响；5)遗留的小基因或300 bp 的ORFs 的出现；6)多基因现象的表型. 此外，mRNA 水平的测量并不能完全揭示细胞调 节；且蛋白质的样品较mRNA 稳定；蛋白质和mRNA 之间的相关系数仅为0.4～ 0.5，还存在转录后加工、翻译调节以及翻译后加工等. 故而，“基因组时代”的 迅猛发展同时激起了人们对“后基因组时代”中蛋白质组研究的需求. 1 1 11 蛋白质组的含义 ［ ］ 蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins 1 提出，指由一个基因组(g enOME)，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(PROTein). 蛋白质组的概念与 基因组的概念有许多差别，它随着组织、甚至环境状态的不同而改变. 在转录时， 一个基因可以多种mRNA 形式剪接，并且，同一蛋白可能以许多形式进行翻译 ［ ］ 2 后的修饰 . 故一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物，蛋白质组中蛋白质 ［ ］ 3 的数目有时可以超过基因组的数目 . 蛋白质组学(Proteomics)处于早期“发育”状态，这个领域的专家否认它是单 ［ ］ 4 纯的方法学 ，就像基因组学一样，不是一个封闭的、概念化的稳定的知识体 系，而是一个领域. 蛋白质组学集中于动态描述基因调节，对基因表达的蛋白质 水平进行定量的测定，鉴定疾病、药物对生命过程的影响，以及解释基因表达调 ［ ］ 5 控的机制 . 作为一门科学，蛋白质组研究并非从零开始，它是已有20 年历史 的蛋白质(多肽)谱和基因产物图谱技术的一种延伸. 多肽图谱依靠双向电泳(Tw o-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)和进一步的图象分析；而基因产物图 谱依靠多种分离后的分析，如质谱技术、氨基酸组分分析等. 2 (2-DE) 2 (2-DE) 22 蛋白质组研究的核心 用于分离的双向电泳((22--DDEE)) ［ ］ 蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s 6 于 1975 年首次建立并成功地分离约1 000 个E.coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳 . 定的，而是随环境而变化 双向电泳原理简明，第一向进行等电聚焦，蛋白质沿 pH . 梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离 目 ［ ］