贮存骨髓涂片提取DNA探讨FLT3基因突变与白血病预后的关系.pdfVIP

中文摘要 研究背景及目的：Fms样酪氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase-3 ，FLT3 ）属于III型受体酪 氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase,RTK)家族成员,在与其配体 FL(FLT3 ligand,FL)结合 后，使酪氨酸残基磷酸化，并通过各种胞浆蛋白传导激活信号，提供增殖刺激，促进白血 病恶性克隆的增殖与维持。近年来，有许多研究发现FLT3基因出现内部串联重复（internal tandem duplication,ITD ）突变，导致近膜结构域（juxtamembrane domain ，JM ）延长，也称 FLT3长度突变（FLT3 length mutation,FLT3-LM ），且发生 FLT3-ITD 的患者具有相对特异 的临床特征。发生突变的FLT3受体在配体非依赖的情况下发生自动磷酸化和组成性激活， 引起下游异常的信号传导，在造血系统恶性疾病的发生发展中具有重要作用。一些急性白 血病（acute leukemia，AL ）细胞共表达FLT3和FL ，两者可能通过自分泌，旁分泌形式发 生FLT3受体的活化，FLT3 的高表达水平可能通过野生型FLT3正常信号传导的强化方式， 在白血病发病中发挥重要作用。本试验旨在研究在骨髓涂片中提取微量DNA及研究FLT3- ITD在AL患者及各亚型中的发生率，及其与白血病发生、发展的关系，探索FLT3-ITD在 AL治疗和预后判断中的应用价值。 方法：在79份-20℃保存1-5年的未经瑞氏染色和化学固定的AL骨髓涂片中提取微量DNA ， 采用基因组DNA聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术检测48例初治急性非淋 巴细胞白血病(acute nonlymphocytic leukemia，ANLL) （其中M 1例，M 18例，M 13例， 1 2 3 M 0例，M 15例，M 1例，M 0例），28例初治急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic 4 5 6 7 leukemia，ALL) ，1例混合细胞白血病患者，1例由骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)转变而来的M2 患者，1例多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)化疗后继 发的M2 患者，对照组10例非恶性血液病人的FLT3-ITD发生率。用logistic 回归分析相关的11 个因素:年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血血红蛋白(hemoglobin， Hb) 、外周血血小板(platelet，PLT) 、肝脾肿大、中枢神经系统浸润、血清肌酐(creatinine， Cr)值、血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)值、FLT3突变情况与初次化疗达 完全缓解(complete remission ,CR)的关系，并对可能影响AL患者预后的15个因素（年龄、 性别、白血病类型、外周血原始细胞比例、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血 Hb 、外周血PLT 、肝脾肿大、淋巴结肿大、中枢神经系统浸润、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH) 、血清肌酐、血清ALT 、FLT3突变情况）运用比例风险模型（Cox 回归）进行生存分析。 结果：采用 PCR 技术，79 例 AL 患者中的 48 例初治 ANLL 患者共检测到 5 例 FLT3-ITD 阳性，突变率为10.42 %（其中1例为ANLL-M2 患者，1例为ANLL-M3 患者，2例为ANLL-M5 患者，1 例为 ANLL-M6 患者），各型之间突变率无统计学差异（P ＜0.05）。28 例初治 ALL ，1 例混合细胞白血病患者，1 例由 MDS 转变而来的 M2 患者，1 例继发于多发性骨 髓瘤（MM ）化疗后的M2 患者和10例非恶性血液病人中均未检测到 FLT3-ITD 。单因素分 析显示 FLT3-ITD 组与非突变组在年龄、性别、白血病类型、外周血原始细胞比例、骨髓 原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血 Hb 、外周血PLT 、血清LDH 值、血清肌酐值、 血清 ALT 值方面无统计学差异（P0.05）； FLT3-ITD 组较非突变组初次诱导CR率低，