曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞.pdfVIP

摘 要 研究目的 介绍一种诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的新方法，并且 研究这种新型诱导剂—— 曲古抑菌素A(TSA) 的适宜浓度。 研究方法 C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞系体外培养。按TSA干预浓度的不同将实验 分为分为6组：对照组（PBS,A组；DMSO,B组) 、干预组（25nM ，C组；50nM， D组；100nM， E组；200nM ，F组）。各组分两阶段用相应的培养基培养10天 后进行检测。 1. 双硫腙（DTZ ）染色鉴定各组的胰岛素分泌细胞，结果进行半定量分析。 2. 免疫荧光染色鉴定各组的胰岛素分泌，比较各组胰岛素平均荧光强度。 3. 酶联免疫吸附试验（Elisa ）检测各组胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量。 4. 根据以上三点的结果确定 TSA 的适宜浓度。 研究结果 1． TSA 能够 10 天诱导 C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细 胞，并且分泌胰岛素。 2. C 组胰岛素染色阳性面积、阳性率、胰岛素染色积分光密度以及胰岛素平均 荧光强度显著高于其他干预组，差异有统计学意义（均 P0.05 ）。 3. 随着各干预组 TSA 浓度的升高，胰岛素的分泌量减少。C 组胰岛素含量显著 高于其他干预组，差异有统计学意义（均 P0.05 ）。 研究结论 本研究表明，TSA 能够 10 天诱导 C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞分化成为 胰岛素分泌细胞，并且 25nM 为 TSA 的适宜浓度。 关键词：骨髓间充质干细胞; 曲古抑菌素A; 胰岛素分泌细胞; 胰岛素 I Abstract Objective: To introduce a new method to induce mice mesenchymal stem cells to differentiate into insulin-secreting cells and explore the appropriate concentration of the new revulsant (TSA). Methods: The C57BL/6 mice mesenchymal stem cell line was cultured in vitro and divided into six groups before treated with different concentration TSA (group A:PBS; group B:DMSO; group C:25 nM ; group D:50 nM ; group E:100 nM ; group F: 200 nM). After exposured to the different cultured medium for ten days during two stages,the cells were detected by follow methods: 1. The insulin-secreting cells in each group were identified by Dithizone Staining and the results of TSA-treated groups were calculated with immunohistochemical half quantitative analysis. 2. The insulin secreted by insulin-secreting cells in each group was identified by Immunofluorescence and the mean fluorescence intensity of insulin in TSA-treated gro