全胚和胎盘组织细胞悬液及其间充质干细胞抗衰老作用的实验研究.pdfVIP

全胚和胎盘组织细胞悬液及其间充质干细胞抗衰老作用的全胚和胎盘组织细胞悬液及其间充质干细胞抗衰老作用的 全胚和胎盘组织细胞悬液及其全胚和胎盘组织细胞悬液及其间充质干细胞抗衰老作用的间充质干细胞抗衰老作用的 实验研究 实验研究 实验研究实验研究 摘 摘 要要 摘摘 要要 目的：目的： 目的目的：： 探索全胚和胎盘组织细胞悬液及其间充质干细胞的抗衰老作用。 方法：方法： 方法方法：： 1. 小鼠胎鼠、胎盘组织细胞悬液的制备以及小鼠胎鼠、胎盘源间充质干细胞的分离、培 养和鉴定 剖宫产取6日龄BALB/c小鼠胎鼠及孕18天BALB/c小鼠胎盘（皆雌雄混合），通过吹 打悬浮、研磨、过滤等机械办法制备小鼠胎鼠、胎盘组织细胞悬液；通过密度梯度离 心法、两步离心法结合贴壁培养法，从小鼠胎鼠、胎盘组织中获取间充质干细胞，鉴 定细胞表面标志；诱导细胞向脂肪细胞、成骨细胞分化，分别以油红O 染色、茜素红 染色进行鉴定。 2. 分别输注小鼠胎鼠、胎盘组织细胞悬液以及小鼠胎鼠、胎盘源间充质干细胞 我们首先腹腔注射 6日龄 BALB/c小鼠胎鼠组织细胞悬液以及孕 18天 BALB/c小鼠 胎盘组织细胞悬液于不同组 15月龄自然衰老雌性 BALB/c老年小鼠腹腔。 其次分别尾静脉注射 6日龄 BALB/c 小鼠胎鼠以及孕 18天 BALB/c小鼠胎盘源间充 质干细胞于其它不同组 15月龄自然衰老雌性 BALB/c老年小鼠体内。 3. 输注前后相关指标检测 输注后计数小鼠存活天数。输注前以及输注 3 个月后，超声心动图检查小鼠心输 出量、每搏量、左心室舒张末容积、左心室质量；第二次超声检查完后首先血清学检 测总超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量以及谷胱甘肽过氧化物酶活力等抗氧化能力指 标；其次检测反映心功能的心脏质量指数（心脏质量/体质量）、反映免疫功能的脾脏 质量指数（脾脏质量/体质量）、反映消化道动力的结肠肌层厚度，解剖学检查干细胞 致瘤性；并对心肌、肾脏、肺脏、皮肤等脏器做组织学衰老程度评分，最后对自然死 亡小鼠 Y染色体原位杂交检测植入的细胞。 I 结果：结果： 结果结果：： 1. 小鼠胎鼠、胎盘源间充质干细胞符合间充质干细胞表面标志特点，成脂诱导后，油红O 染色为阳性。成骨诱导后，茜素红染色也均为阳性。 2. 小鼠胎鼠、胎盘组织细胞悬液输注组以及小鼠胎鼠源间充质干细胞输注组输注后的存 活日期至少1.3倍于相应对照组,差异有统计学意义（均P0.05）。 3. 输注后未发现输注对小鼠造成不良影响，也未发现干细胞致瘤性；Y染色体原位杂交实 验在所有输注组小鼠脏器检测到输注细胞长期存活。 4. 小鼠胎鼠组织细胞悬液输注组、小鼠胎盘组织细胞悬液输注组以及小鼠胎鼠源间充质 干细胞输注组分别与对照组心输出量减少量、每搏量下降量、左心室质量增加量、左 心室舒张末期容积减少量、心脏质量指数、脾脏质量指数、结肠肌层厚度，心脏、肾 脏、肺脏、皮肤等器官组织学衰老程度分值，血清总超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量 以及谷胱甘肽过氧化物酶活力,各指标的差异皆有统计学意义（均P0.05）。 5. 小鼠胎盘源间充质干细胞输注组与对照组除了血清总超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量 以及谷胱甘肽过氧化物酶活力之间的差异有统计学意义外（均P0.05），输注后存活日 期等以上其它各指标的差异皆无统计学意义（均P0.05）。 结论：结论： 结论结论：： 1. 小鼠胎盘中能分离出间充质干细胞。 2. 小鼠胎鼠组织细胞悬液、小鼠胎盘组织细胞悬液以及小鼠胎鼠源间充质干细胞有抗小 鼠衰老作用。 3. 小鼠胎盘间充质干细胞没有明确的抗小鼠衰老功效。