胰腺微环境下间充质干细胞分化为胰岛样细胞的机制初探.pdfVIP

暨南大学 硕士论文 杨亚丽 1． 摘 要 目的 骨髓间充质干细胞(BMSCs)植入到胰腺微环境下，观察对糖尿病模型鼠的影响，植 入后细胞的再分布，初步探讨植入的 BMSCs 分化为胰岛样细胞的机制。 方法 从同种异体 SD 大鼠骨髓中获取 BMSCs，纯化后用逆转录病毒（RV）转染绿色荧光 蛋白（EGFP）标记，以多点注射的方法移植入到糖尿病大鼠胰腺包膜下。移植后动态监测 血糖、胰岛素和 C-肽变化；通过 EGFP 示踪观察植入的 BMSCs 的分布；移植后 1、2、3、5、 8及12w，取EGFP标记的胰腺组织，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR ）检测 PDX-1、ngn 3、nestin、Nkx 2.2、pax 4 和 EGFP 的表达；移植后 8w 取 EGFP 标记的胰腺 组织，免疫荧光染色和荧光原位杂交检测检测 EGFP 和胰岛素、EGFP 和 PDX-1 的共表达， 流式细胞术分析EGFP标记的胰腺组织细胞DNA倍性。 结果 移植 6d 后糖尿病鼠血糖开始降低，24d 后接近于正常鼠水平（150±42.0mg/dL）； 移植 14d 后胰岛素、C 肽水平开始升高，到 56d 稳定在较高水平（1.0±0.2μg/L ，1.2 ±0.3 nmol/L ）。移植后 8w，植入细胞稳定表达 EGFP，植入细胞在胰腺组织分布于胰岛 （12.46%）、血管（4.4%）、导管（3.21%）、腺泡（9.24%）和组织间隙（70.69%）。免疫荧 光染色发现有 EGFP 和胰岛素共表达细胞（5.16%），FISH 发现有 EGFP 和 PDX-1 mRNA 共表 达细胞（0.96%）；移植到胰腺微环境中的 BMSCs，1w 时检测到 PDX-1、 ngn 3、nestin、 Nkx 2.2和pax 4的表达，2到3w时各基因表达水平持续上调，5w左右达到最大值，以后 逐渐下调，12w 时 nestin、ngn 3、pax 4 不表达。流式细胞术测定 EGFP 标记的胰腺组织 中细胞核型为整二倍体或四倍体，未见多倍体或非整倍体细胞。 结论 BMSCs 胰腺包膜下移植后，糖尿病大鼠血糖降低、胰岛素和 C 肽水平升高；BMSCs 植 入后在胰腺中发生再分布；胰腺微环境下，BMSCs 能跨胚层分化为胰岛样细胞，基因表达 符合β细胞分化的时序性变化，没有与胰腺组织细胞发生融合。 关键词 骨髓间充质干细胞;糖尿病; 移植;胰腺微环境;胰岛素;分布;分化;机制 Ⅰ 暨南大学 硕士论文 杨亚丽 Abstract Objective To object the therapeutic effect and the cell distrubution after bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs ） transplanted into pancreas microenvironment of diabetic model rats ，and to investigate the mechanism of BMSCs differentiated into insulin-secreting cells . Methods BMSCs of allogeneic male SD rat were isolated from bone marrow, purified and transfected with enhanced green fluorescent protein (EGFP) for tracing,