水稻单个端粒长度定量测定及分析.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第4期，2013年7月 of Sci—Tech JournalZhejiang University V01．30，No．4，Jul．2013 文章编号：1673—3851(2013)04—0585—05 水稻单个端粒长度定量测定及分析 马国兴，马登旭，杨力媛，郑洁，韦敬航，刘dJII (浙江理工大学生物工程研究所，杭州310018) 摘要：端粒是真核生物线性染色体末端的特殊结构，一定长度的端粒在维持真核生物遗传信息完整性和染色 体结构稳定性中起重要作用。建立一种简单快捷定量测定水稻单个端粒绝对长度的方法对研究水稻各个染色体端 粒具有积极的意义。研究将特殊接头连接到水稻染色体端粒的Goverhang末端，并利用近端粒区域的特定引物以 及下游接头引物，通过PCR技术，获得所需鉴定的端粒，结合DNA凝胶电泳成像分析系统，定量检测水稻单个端粒 的长度。结果显示本方法可以通过少量水稻基因组DNA有效测定单个端的粒长度。 关键词：水稻；单个端粒；PCR技术；定量测定；端粒长度 中图分类号：Q291 文献标志码：A 并将其分化生成植株，发现端粒长度在脱分化和再 0引言 分化的过程中也无显著差异，而Riha等[10]则发现 端粒是真核生物线性染色体末端高度保守富含 女娄菜、大麦和拟南芥愈伤组织端粒的长度会变长。 鸟嘌呤的特殊元件，能有效防止染色体末端融合，从 有文章报道拟南芥晚期形成的最短端粒长度大约是 350 而维持了遗传信息的完整和染色体结构的稳定[1]。 bp，融合桥连序列的补充分析显示端粒的长度 范围是120～450 一定长度的端粒是端粒帽状结构形成的必要条件， bp，平均值为260bp[11|。以上研 是细胞进行正常生命活动的重要保证。端粒的保护 究均建立在细胞中所有端粒平均长度的基础上，然 功能以及端粒酶对端粒的延伸效率与Gover—而，同一细胞的各个染色体的端粒长度存在着显著 2|、G-四链体(阻碍端粒酶的延伸作用)[33、T_差异，它们对各染色体的作用并不清晰，可见特定单 hangE 个端粒长度的准确测定具有深远的意义。 loop和D-loop等特殊结构密切相关，而这些结构的 形成在一定程度上也取决于端粒的长度。研究显示 目前测定端粒长度的方法较多，常见的方法有： 端粒还可使位于亚端粒区域中的基因处于沉默状 Southern杂交法(southern fluorescence 态，即位置效应(telomereeffect，TPE)[4]。光定量PCR法(real—time position 这种位置效应的强弱与端粒长度同样存在着密切关 PCR，FQ in 系，长端粒产生的TPE效应强，可以显著抑制亚端 tativefluorescencesitu 粒区报告基因的表达；而随着端粒长度变短，TPE 效应会随之减弱[5]。植物端粒酶广泛分布在各器官 方法只能测定细胞中所有端粒的平均长度，无法测 的分生组织中[6]，这使得植物端粒长度的变化机制 定细胞单个端粒绝对长度的要求。最近许多新颖的 比较特殊，需要深入研究。Broun等[7]发现4周龄 和6个月的番茄叶片的端粒长度几乎没有差异，在 良了一种可以检测单个染色体端粒长度的技术