一种葡聚糖活性检测的新方法.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第5期，2013年9月 of Sci—Tech JoumalZhejiang University V01．30，No．5，Sept．2013 文章编号：1673—3851(2013)05—0738一04 一种葡聚糖活性检测的新方法 张晓菲8-v，严珍珍8．v。谢辛慈8，吴佳8，宋如錾8，u，舒建洪a，6，吕正兵a．6 (浙江理工大学，a．生命科学学院生物化学研究所；b．浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州310018) 摘要：大多具有分支的B-(1—3)一D葡聚糖具有免疫调节及抗肿瘤活性。文章利用人单核白血病THP_1细胞 株建立细胞水平上葡聚糖生物活性的检测方法，实现高通量筛选活性多糖。THP_1细胞在不同浓度的葡聚糖刺激 48h后离心收集上清，ELISA法检测其释放细胞因子浓度，以筛选有效的评价指标。结果显示：THP_1细胞在不同 葡聚糖刺激下，细胞培养液中IFN_d含量变化明显。IFN-a可作为在细胞水平上评价葡聚糖活性的标准检测指标。 该方法既克服了动物实验工作量大、成本高，又克服了原代细胞不稳定等因素，为高通量筛选活性多糖提供了新 途径。 关键词：THP-1；葡聚糖；活性检测；高通量筛选 中图分类号：Q819 文献标志码：A 消耗多等不足；原代细胞检测法亦存在细胞稳定性、 0 引 言 实验误差大等问题。因此，亟待建立一种高通量检 葡聚糖是由葡萄糖单体聚合而成的多糖，分为 测多糖生物活性方法。 a型和B型。a型是机体能量的主要来源，不具备生 1 实验材料和方法 物活性；B型葡聚糖则是一种生物活性物质，具有免 疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血 1．1材料 糖、降血脂、保肝等多种功能[1]。研究还发现，大多 THP-1细胞株，浙江理工大学生命科学学院保 数具有抗肿瘤活性的多糖都是带有G-(1—6)一D糖苷 自北京永辉生物科技有限公司；RPMll640培养基， 键分支的p(1—3)一D葡聚糖[2]。食用菌多糖也被称 作“生物反应调节物”[3‘]，大多为具有分支的p(1—购自杭州吉诺生物医药技术有限公司；冬虫夏草多 3)一D葡聚糖[6]。近年来，因其多重功效而备受青糖(含量95％)，中国药科大学尹红萍老师提供；蛹 睐，具有很好的开发前景。 虫草多糖(含量95％)，本实验室制备；绣球菌葡聚 不同多糖的生物活性有所差别。多糖活性的高 糖(含量95％)，上海科爱生物技术有限公司提供； 低受其结构、分子量等多种因素影响[7曲]，因此，相同 灰树花多糖(含量95％以上)，购自浙江方格药物有 糖含量的药品或保健品的功能也会存在很大差异， 限公司。 单纯的糖含量并非药物有效性的指标。检测食用菌 1．2方法 多糖生物活性是判断多糖药品及保健品功效的一种 1．2．1细胞株的培养 直接有效的方法。目前，有关多糖生物活性的检测 手段主要是整体水平和原代细胞水平检测。传统的 完全培养基中，置于37℃，5％C02饱和湿度的二氧 动物实验检测法存在动物个体差异、工作量大、资金 化碳培养箱中培养，3～5d传代1次，1瓶传2瓶或3 收稿日期：2013一01—14 作者简介：张晓菲(1987一)，女，山东青岛人，硕士研究生，主要从事生物化学与分子生物学及生物工程制药的研究。 cn 通信作者：吕正兵，电子邮箱：zhen曲ingl@yahoo．coIIL 万方数据 第5期 张晓菲等：一种葡聚糖活性检测的新方法 ooo r／rnin，5 瓶，细胞碎片较多时离心(1