玉米端粒酶RNA模板基因候选序列的转基因鉴定体系研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第5期，2013年9月 of Sci—Tech Joumal Zhejiang University V01．30，No．5，Sept．2013 文章编号：1673—3851(2013)05—0762—04 玉米端粒酶RNA模板基因候选序列的转基因 鉴定体系研究 郑洁，杨力媛，马国兴，马登旭，刘小川 (浙江理工大学生物工程研究所，杭州310018) 摘要：研究采用pCAⅧIA1301穿梭质粒和LBA4404菌株，侵染不同品种玉米成熟胚诱导的愈伤组织，以 1301穿梭质 构建玉米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系。构建了两个含有玉米端粒酶RNA的pCAⅧIA 粒，一个携带模板区正常的玉米端粒酶RNA候选序列(野生型)，另一个携带模板区定点突变处理的端粒酶RNA候 选序列(突变型)，然后分别侵染甜玉米成熟胚诱导的愈伤组织，也同样分别侵染糯玉米成熟胚诱导的愈伤组织。结 果表明：在愈伤组织培养中，甜玉米的愈伤诱导率在40％左右，而糯玉米的愈伤诱导率高达80％；在抗性筛选培养基 上已成功获得抗性愈伤组织，经PCR鉴定愈伤组织基因组中分别含有正常和突变的目的片段，这表明成功构建了玉 米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系，为进一步鉴定相关候选序列提供有效的技术方法。 关键词：甜玉米；糯玉米；端粒酶RNA模板基因候选序列；农杆菌介导法；抗性愈伤组织 中图分类号：Q785 文献标志码：A 粒酶RNA模板基因序列尤为重要[5]。如果改变端 0 引 言 粒酶RNA模板基因序列就会导致整个玉米基因组 端粒是真核细胞线性染色体末端由核酸和端粒 端粒末端重复序列的改变，影响遗传物质的稳定性。 结合蛋白所构成的特殊结构，其中核酸部分由富含 目前，尚未见有关玉米端粒酶RNA模板基因序列 鸟嘌呤的重复序列串联而成，对稳定染色体发挥作 克隆的报道，而现在的研究就是致力于这一方面。 用[1]。细胞每进行一次分裂，端粒就会丢失部分碱 本研究将玉米端粒酶RNA模板基因候选序列 基，当端粒长度缩短到临界值时，细胞分裂就会停止 插入pCAMBIA1301穿梭质粒，采用电击法[63转化 并出现衰老和死亡，故端粒被称为细胞的“有丝分裂 农杆菌感受态细胞，以玉米端粒酶RNA模板基因一 1301一农杆菌体系的形式侵染玉米成熟 钟[2]，’。端粒在保护染色体末端、引导同源染色体配 pCAMBIA 对、保证DNA复制完整等方面起着重要作用。 胚诱导的愈伤组织，以构建玉米端粒酶RNA模板 端粒酶是一种由端粒酶RNA组分、端粒酶相 基因候选序列转基因鉴定体系。玉米端粒酶RNA 关蛋白和端粒酶催化亚基3部分组成[3]的核糖核蛋模板基因候选序列转基因鉴定体系的构建，为继续 白酶，它作为逆转录酶，参与端粒序列的合成。其中 鉴定候选序列提供了有效的方法。 端粒酶RNA组分是端粒酶作用的模板，利用端粒 1材料与方法 酶的逆转录酶活性识别并结合到端粒末端序列上， 反转录延伸端粒缩短的序列加到染色体3’末端延 1．1材料 伸端粒长度。端粒酶催化亚基[4]是维持端粒酶活性 质粒、菌株及植物材料：p№18一T，pC伽慨 的核心成分之一，在永生化细胞中表现出高表达。 植物细胞共用一套端粒酶RNA模板基因序列，端 实验室提供，糯玉米、甜玉米购于杭州下沙农贸市场。 收稿日期：2012—11一07 作者简介：郑洁(1988一)，女，浙江乐清人，硕士研究生，研究方向为端粒与端粒酶。 通信作者：刘小川