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miRNA 人工靶序列模拟及病毒表达载体研究进展 摘要：MicroRNAs (miRNAs)作为一种新型的调控基因表达的小分子 RNA,人们已经认识到这类小分子 miRNA 在生物体发育、 细胞增值与分化、激素分泌、肿瘤形成等过程中扮演者重要角色。miRNA 靶基因的确定是研究 miRNA 生物学功能的关键。 已有研究将黄瓜花叶病毒这一寄主范围最广和高复制水平的植物病毒作为病毒表达载体，结合运用人工靶序列模拟技术，模 拟出 miRNA 靶基因的修饰互补序列，以此来阻遏 miRNA 的原始下游通路，干扰 miRNA 的调节作用,从而明确 miRNA 的 靶基因。本文就时下相关 miRNA 的人工靶序列模拟以及病毒表达载体进行综述，为今后进一步miRNA 模拟靶序列及病毒载 体技术的发展指明方向。 关键字：MicroRNAs ；黄瓜花叶病毒；病毒表达载体；人工靶序列模拟 MiRNA Artificial Target Sequence and Virus Expressing Vector Abstract: As a novel small molecules RNA regulating gene expression, it had been recognized that such a small miRNA molecule plays an important role in the organism development, cell proliferation and differentiation, hormone secretion, and the process of tumor formation, etc. The key to biological function of miRNA research is identification of miRNA target genes. It has been reported that cucumber mosaic virus combining with miRNA mimic target sequence can repress original downstream pathway of miRNA and interfere with regulation of miRNA, which can help to figure out the target genes of miRNA. Key words: miRNAs; cucumber mosaic virus; virus expressing vector; mimic target sequence 1. 植物 miRNA 概况 1.1 植物 miRNA 的生物学特征 miRNA 是一组由基因组编码的长度约 20～23 个核苷酸的真核生物内源性非编码 RNA ，在病毒、植物 和动物体中，通过与靶基因的互补配对，降解相应的 mRNA或抑制其翻译，以负性调控靶基因的表达。1993 年,Lee 等[1] [1] 首先在秀丽新小杆线虫中发现了第一个 miRNA lin-4 。随后Reinhart 等 在线虫中又发现了另一 个与类似 lin-4 的具有转录后调节功能的小RNA ：let-7 。大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇的 形式存在于基因组中,而且大部分位于基因间隔区,保守性、表达阶段性和组织特异性是 miRNA 的主要特点, 即miRNA 在各个物种间具有高度的进化保守性,同时在生物发育的不同阶段里有不同的 miRNA 表达,而且 不同组织中表达不同类型的 miRNA 。 1.2 植物 miRNA 的生物合成与作用机制 在植物细胞核中，miRNA 基因转录后，首先形成初级转录本 pri-miRNA ，接着背剪切成包含金环结构 的miRNA 前体 pri-miRNA ，然后pri-miRNA 在 DCLI （Dicer-like I ）的作用下切割成70nt 至 350nt 的茎环 状前体，继而在 DCLI 酶和 RNA 结合蛋白 HYLI