用于重组抗体生产的细胞构建技术研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（６）：１１１１１６ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 檪 医药生物技术专栏 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 用于重组抗体生产的细胞构建技术研究进展 刘伯宁 （华北制药集团新药研究开发有限责任公司抗体药物研制国家重点实验室　石家庄　０５００１５） 摘要　构建生产细胞系是重组抗体产业化制备的第一步。目前国际上用于重组抗体生产的工程 细胞系表达水平可达２０～７０ｐｃｄ。多种动物细胞根据其特性的不同，在抗体药物生产中有着不同 的应用。近年来，工程细胞系构建技术的研究进展主要集中在以下三个方面：利用细胞工程技术 提高宿主的生长、表达能力，新型载体功能元件和定点整合技术克服载体随机整合时发生的“位 置效应”，以及应用流式细胞分选术和高通量筛选机器提高重组细胞的筛选通量和效率。 关键词　重组抗体　细胞构建　载体元件　筛选策略 中图分类号　Ｑ８１９ 　　近年，随着宿主细胞遗传特性的改造，表达载体功 力，所表达的重组抗体与人天然抗体存在着显著的质 能元件的优化，以及高通量克隆筛选技术的发展，国际 量差异。只有哺乳动物细胞适宜重组抗体的异源表 上用于抗体药物生产的工程细胞系表达水平可达２０～ 达。因此，目前已上市的治疗性抗体中，除了少数抗体 ＴＭ ［５６］ ７０ＰＣＤ（ｐｇ／ｃｅｌｌ／ｄａｙ）。业内完成稳定细胞系的构建时 片段（如：Ｌｕｃｅｎｔｉｓ ）外，均由哺乳动物细胞生产 。 ［１］ １．１　用于抗体药物生产的宿主细胞 间也缩短至３～６个月 。生产细胞系的构建是重组 抗体产业化制备的第一步。作为抗体产业上游关键技 　　哺乳动物细胞中，ＣＨＯ、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞、 术，如何快速、高效建立生产细胞系，是我国抗体产业 ＰｅｒＣ．６、ＨＥＫ２９３等均有用于重组抗体生产的实例（表 ［２］ ［６］ 发展中急需解决的技术瓶颈 。 １） ，这其中ＣＨＯ、ＮＳ０及ｓｐ２／０细胞由于具备相对成熟 “平台化开发技术”应用较为广泛。上述动物细胞由于 １　用于重组抗体生产的工程细胞系构建 其生长、代谢特性的不同，对重组抗体的表达、修饰能力 流程 也不尽相同。ＣＨＯ、ＮＳ０，ｓｐ２／０均可产生非人源的糖基 　　抗体分子具备四聚体糖蛋白的复杂分子结构，其 化修饰。如：ｓｐ２／０生产的 Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ因含非人源“α ［７］ 胞外表达又遵循着“分泌蛋白”的一般规律：全抗体分 （１，３）半乳糖结构”造成临床上出现过敏反应 等。 子的轻、重链各自翻译后，经折叠、组装，糖基化修饰后 １．２　“工程细胞”的概念与构建流程 才具生物活性。已上市抗体药物的临床研究也表明， 　　用于抗体药物生产的工程细胞系需具备以下特 宿主细胞对重组抗体的“翻译后修饰”，直接影响到抗 性：生长特性良好，无血清悬浮培养密度高（１～２× ［３４］ ７ 体药物的临床疗效和免疫原性 。 １０ｃｅｌｌ／ｍｌ）；异源蛋白表达能力强（２０～７０