肠出血性大肠埃希菌O157H7菌影生物学活性的初步研究.pdfVIP

·员园圆园 · 安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 杂藻责；源苑（怨） 肠出血性大肠埃希菌 韵员缘苑 颐匀苑菌影生物学活性的初步研究 黄春艳，蔡摇 昆，王摇 兴，王摇 博，丁摇 晓，裴秀英 摘要摇 目的摇 制备肠出血性大肠埃希菌 韵员缘苑 颐 匀苑 细菌菌 然的外膜抗原结构，可以有效地诱导机体产生免疫 影，在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价。方法 反应，并且相比于其它物理化学灭活菌，因为不含细 摇 将包含噬菌体责澡蚤载员苑源裂解基因耘 的重组质粒责蕴杂耘转化 胞内含物而更安全［缘］。目前已验证菌影在机体中 肠出血性大肠埃希菌 韵员缘苑 颐 匀苑 耘阅蕴怨猿猿 及大肠埃希菌 既能产生体液免疫反应，也能产生细胞免疫反 阅匀缘 ，源圆益诱导制备菌影。利用间接免疫荧光实验观察菌 α ［远］ 应 。同时，菌影的内在佐剂作用也有利于其作为 影主要抗原结构，并利用电镜观察菌影对 匀藻责鄄圆 细胞的黏 ［苑］ 疫苗的应用开发 。该研究通过构建表达裂解基 附。将菌影免疫小鼠后，采用间接耘蕴陨杂粤法检测小鼠特异性 抗体，并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果。结果摇 成 因的重组质粒，经温度诱导后制备韵员缘苑 颐 匀苑 菌影， 功构建了重组质粒责蕴杂耘，制备出韵员缘苑 颐 匀苑及 阅匀缘 菌影。 对其外膜主要抗原的表达进行检测，并在细胞及动 α 韵员缘苑 颐 匀苑 菌影保留了病原菌的主要外膜抗原，能紧密黏附 物水平上初步评价其生物学活性，为研制新型韵员缘苑 细胞匀藻责鄄圆 但并不侵入细胞。韵员缘苑 颐 匀苑 菌影免疫雄性 颐 匀苑 口服疫苗奠定基础。 月粤蕴月辕 糟小鼠诱导特异性陨早郧抗体的产生。攻击试验结果显 示小鼠对致死剂量韵员缘苑 颐 匀苑 耘阅蕴怨猿猿强毒株的保护率达到 员摇 材料与方法 愿园豫。结论摇 韵员缘苑 颐 匀苑菌影的成功制备及生物学活性的初 员援员摇 材料 步析为研制韵员缘苑 颐 匀苑菌影疫苗奠定了基础。 员援员援员摇 菌株与质粒摇 孕澡蚤载员苑源 阅晕粤 购自 晕耘月 公 关键词摇 大肠埃希菌；韵员缘苑 颐 匀苑；菌影；抗原；黏附；免疫 司；大肠埃希菌耘援糟燥造蚤 阅匀缘 及责酝阅员愿鄄栽 载体购自 中图分类号摇 匝怨猿；砸猿苑猿援怨 α 文献标志码 粤 文章编号 员园园园原员源怨圆（圆园员圆）园怨原员园圆园原园缘 栽 运 砸 公司；肠出血性大肠埃希菌 韵员缘苑 颐 匀苑 耘阅蕴怨猿猿、责月灾圆圆园载体及匀藻责鄄圆细胞由本室保存。 摇 摇 肠出血性大肠埃希菌（藻灶贼藻则燥澡藻皂燥则则澡葬早蚤糟 藻泽糟澡藻鄄 员援员援圆摇 主要试剂摇 栽 择 阅晕粤 聚合酶、阅晕粤 标志物、 则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤，耘匀耘悦）是一种重要的人畜共患病原菌。 耘糟燥砸 陨及杂 造陨 限制性核酸内切酶均购自栽 运 砸 公 其中，韵员缘苑 颐 匀苑 导致的感染占总数 缘园豫 耀 司；小鼠抗蕴孕杂抗体、云陨栽悦标记羊抗小鼠 陨早郧二抗 ［员］ 及匀砸孕标记羊抗小鼠陨早郧二抗均购自杂蚤早皂 公司； 愿园豫 ，能引起出血性结肠炎等严重胃肠道病症， 少量病例还可引起致死性溶血性尿毒综合征 韵员缘苑及匀苑 抗血清（小鼠）购自