硫代反义寡聚核苷酸在线性聚丙烯酰胺2毛细管电泳中的分离.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 3 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 353～356 硫代反义寡聚核苷酸 在线性聚丙烯酰胺毛细管电泳中的分离行为 邓　斌　罗国安 王　君　巫祥云 (清华大学生命科学与工程研究院 ,北京 100084) (金赛狮生物制药公司 ,北京 100081) ( ) 摘 　要 　通过对硫代反义寡聚核苷酸在毛细管线性聚丙烯酰胺胶 LPA 中的电泳行为的研究 ,发现在 10 %浓 ( ) 度的LPA 和 100 mmolL Trisborate 及 7 molL 尿素的缓冲溶液中 pH = 8. 2 ,这类被分析物质有着较好的分离 效果和重现性 ,能使相差一个碱基的硫代反义寡聚核苷酸片断得到基线分离。非常适合用于对合成的反义寡 聚核苷酸的定性分析并进一步应用于纯度测定。 关键词 　硫代反义寡聚核苷酸 ,毛细管电泳 ,线性聚丙烯酰胺胶 1 　引　　言 ( ) 反义寡核苷酸 AON 是一类通过序列特异地与靶基因 DNA 或 mRNA 结合而抑制该基因表达、在基 ( ) 因水平调控的分子药物。而硫代反义寡聚核苷酸 phosphorothioate oligonucleotides ,简称 PSODNs ,是用 ( ) 硫原子将磷酸骨架上的非成键氧原子取代后形成的一类新的寡核苷酸类似物 图 1A ,长度在 5～40 核 苷酸之间。它克服了寡核苷酸在血清中易被核酸酶降解的特性1 。在合成这一类反义寡核苷酸中 ,常 常需要对合成产物的长度、纯度等进行准确测定 , 以免影响后一步的活性实验和使用效果。目前,毛细 管凝胶或流动胶电泳方法已被广泛应用于单链或双链寡核苷酸的分离研究 ,能够较好地完成相差一个 碱基的寡核苷酸的分离和分析2 ～5 。 在许多人类肿瘤中常常可以见到基因的异常表达。通过设计并合成特定的反义寡核苷酸序列 , 与 过度表达的肿瘤靶基因 mRNA 特异性的互补结合 ,从而抑制该基因的表达 ,逆转这类癌症的发生。P100 ( ) ( ) 5’CACGGTGCGTCGACGCACTA3’ 和 P101 5’GGTTTTACCATCGGTTCTGG3’ 分别是根据此原理 设计的由 20 个核苷酸组成的反义寡核苷酸序列 ,用于肺癌等肿瘤生长的抑制实验。本文对硫代后的 P100 和 P101 寡核苷酸进行了毛细管LPA 电泳的分离,可用于此类设计好的分子药物的纯度测定。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂