UP2PCR结合RFLP对脑脊液标本中病原菌的检测.pdfVIP

第 39 卷　第 1 期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 Vol. 39 , No. 1 2003 年 3 月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QIN GDAO UNIVERSITATIS March 　2003 U PPCR 结合 RFL P 对脑脊液标本中病原菌的检测 1 2 1 闫志勇 　张 　璇 　王 　斌 ( ) ( ) [摘要] 　①目的 　建立通用引物聚合酶链反应 U PPCR 结合限制性酶切片段长度多态性 RFL P 酶切图谱 分析快速检测脑脊液标本中常见病原菌的方法。②方法 　通过对体液标本中常见病原菌 16S rRNA 基因保守区的 序列分析 ,设计通用引物 ,对不同细菌的 DNA 进行 U PPCP 扩增 ,确定标本是否有细菌感染 ,然后对阳性标本的扩 增产物分别用不同的限制性内切酶酶切 ,进行 RFL P 分析 ,进一步鉴定细菌。并与常规细菌培养鉴定法进行比较。 ③结果 　U PPCR 结合 RFL P 法最低可检测出 8 cfu ·mL - 1 大肠埃希菌和 250 cfu ·mL - 1 金黄色葡萄球菌 ;该法对 102 份脑脊液标本的检测中 ,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为 92. 3 % 、96. 6 % 、80. 0 %和98. 0 % , 较培养法好。④结论 　该方法可以准确、快速地检测出脑脊液标本中感染的病原菌。 [ 关键词] 　脑脊髓液 ;细菌 ;聚合酶链反应 ;限制性内切酶图谱法 ( ) [ 中图分类号] 　Q7 　　[文献标识码] 　A 　　[文章编号] 　1001 - 4047 2003 01 - 0004 - 03 RAPID DETECTION AND IDENTIFICATION OF PATHOGENS IN CSF WITH UNIVERSAL PRIMERS PCR AND RFLP 　 YA N Zhiyon g , ZHA N G X uan , WA N G Bi n 　Department of Microbiology , Qingdao University Medical College , Qingdao 266021 [ ABSTRACT] 　Objective 　To establish a method to rapidly detect and identify pathogens in CSF with universal primers PCR and restriction enzyme analysis. 　Methods 　According to the analysis of the conservative and variable regions in bacterial 16S rRNA genes , a universal primer was designed for all bacteria capable of amplif ying DNA of various bacteria to determine whether there were bacteria. The PCR products were then digested with different restriction enzymes to finally identify clinical pathogens in 102