人类基因克隆及表达载体的构建.pdfVIP

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2017-09-14 发布于重庆
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人类基因克隆及表达载体的构建.pdf

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( ) ( ) ISSN1007 - 8738 细胞与分子免疫学杂志 Chin J Cell Mol Immunol 2004 , 20 1 53 ( ) 文章编号 : 1007 - 8738 2004 01 - 0053 - 02 人类 TAP1 基因克隆及表达载体的构建 1 1 1 1 2 1 刘　玉 , 李殿俊 , 吕雪莹 , 杨秋霞 , 谷金宇 , 王　兰 ( 哈尔滨医科大学 : 1 免疫学教研室 , 2 附属二院普外科 , 黑龙江哈尔滨 150086) 关键词 : TAP1 ; 基因克隆 ; 表达载体的构建 ; 序列分析纯化产物加尾与载体连接 , 以重组质粒转化受体菌, 按照中图分类号: Q785 　　　　文献标识码 : A pcDNA3. 1/ V5His TOPO TA 试剂盒中的方法进行。转化菌接种于 AmpLB 培养板过夜。 1. 2. 4 　重组质粒的 PCR 鉴定　根据 Amp抗性筛选挑取阳性 ( ) ( 　　抗原处理相关转运体 TAP 属于 ABC A TPbinding cas 白斑菌落, 接种于 AmpLB 培养基中过夜。将菌液煮沸 , 以 ) sette 转运体超家族 B 亚家族。人类 TAP 基因位于 6 号染色 TOP10 中扩增的 DNA 为模板 , 用扩增 TAP1 基因的引物进体上的 MHCII 类基因区 , 其编码的 TAP1 和 TAP2 分子 , 分行 PCR , 反应体系及参数同上。提取插入片段大小为 2. 6 kb 别由 748 和 686 个氨基酸残基所组成 , 两者可形成异源二聚的重组质粒 , 参照 MiniBEST 质粒纯化试剂盒的方法进行纯体参与肽类的转运过程 , 在 MHCI 类分子介导的抗原递呈途化。重组质粒中 TAP1 基因插入方向的鉴定 : 以质粒提取产径中起着重要作用[ 1 , 2 ] 。因此 , TAP 的异常将严重影响抗原物为模板 , 用 pcDNA3. 1/ V5His TOPO TA 载体上特异性的递呈 , 成为病毒感染及肿瘤细胞逃避免疫监视的重要机制