ConA活化的灭活自身T细胞免疫增强小鼠肿瘤免疫的研究.pdfVIP

《现代免疫学~2009年 29卷第 6期 ConA活化的灭活 自身T细胞免疫增强小鼠肿瘤免疫的研究 史媛 ，王利 ，林锦骠 ，沈佰华 ，吴娟娟．张壮壮，李宁丽 (上海交通大学医学院 上海市免疫学研究所 ，上海交通大学医学科学研究院，上海 200025) 摘要 ：本研究发现用 ConA活化的灭活 自身 T细胞皮下免疫 C57BL／6J小 鼠后 ，能够 明显抑制小 鼠淋 巴瘤细胞株 (EL-4)在 体 内生长 ，小鼠生存时间延长 。对其作用机制研究发现 ，Thl型细胞 因子分泌增加 ，而外周血调节性 T细胞 (Treg)数量减 少 ，对效应性 T细胞的抑制功能减弱 。进一步分析Treg减少的研究表 明：免疫后小 鼠血清中抗CD25抗体增多，血清过继 转移实验证实正常小 鼠接受 了免疫小鼠血清后其体 内的 CD4 CD25 Treg减少 。因此 ，本研究提示用 ConA活化 的灭活 自 身T细胞免疫可以通过上凋 Thl细胞活性、降低 Treg数量和功能而增强抗肿瘤的免疫反应 ，达到抑制肿瘤的生长效应 。 关键词 ：ConA活化 的灭活 自身 T细胞 ；抗肿瘤免疫 ；调节性 T细胞 ；抗 CD25抗体 中图分类号 ：R392．32 文献标识码 ：A 文章编号 ：1。](1—2478(2009)06—0480—06 目前发现恶性肿瘤微环境 中有大量 Treg的浸 1．2 主要试剂和器材 红细胞裂解液 (NH。C1)由 润，这些浸润的Treg直接抑制了机体 Thl细胞功 本实验室 自行配制；淋巴细胞分离液；ConA(Vec— 能，降低 CTI和 NK细胞等杀伤和抗肿瘤 的免疫 tor Laboratories， Burlingama， CA ， USA )； 细胞活性 。用抗 CD25单抗去除Treg可 以有效 DynabeadsT cellNegtiveIsolationKit(DynalBio— 恢复机体的抗肿瘤作用证实了Treg在抑制肿瘤免 tech，Norway)；细胞培养 RPMI1640(hyclone)； 疫中的作用。因此 ，如何下调 Treg以达到增强机 FITc／APC—CD4，PE—GITI，FITC／PE—CD25，同 体抗肿瘤效应是当今 的研究热点。实验室发现 ，采 型对 照 (BD Bioscience，USA)；Foxp3胞 内染 色 用 ConA活化的 自体灭活 T细胞 免疫可 以上调正 试剂盒 (eBioscience，USA)；CD4一CD25一regula— 常小 鼠的Thl细胞功能、上调 CTL和 NK细胞的 toryTcells分选试剂盒 (Mehiny，德国)；II一12， 杀伤作用 ，同时下调 Treg数量和功能 。本文采 IFN一7和 TNF—QELISA kit(BD Pharmingen，San 用 EL4小鼠肿瘤模型，观察 了ConA活化的灭活 Diego，CA，usA)；[。H]一胸腺嘧啶(中科院上海 自身 T细胞免疫增强荷瘤小 鼠肿瘤免疫 的作用和 原子核研究所) 机制 ，结果发现如前述研究一致 ：这种免疫可以使 1．3 方法 小鼠体内的Treg数量和功能下调 ，并且可以通过 1．3．1 ConA 活化的灭活 自身T细胞的制备及免 血清被动转移。为进一步研究采用这种细胞免疫而 疫小鼠和肿瘤的接种 无菌分离 C57BL／6J小 鼠脾 达到抗肿瘤的免疫治疗提供了新思路 。 脏单个核细胞，显微镜下计数 ，用含 1O％胎 牛血 清的 RPMIl640重悬 ，调整细胞浓度为 4×10。／ 1 材料与方法 ml。用 3#g／mlConA刺激 ，置于 37℃、5 CO2 1．1 实验动物 健康雌性 C57BL／6J小 鼠(4～6 细胞培养箱 内培养 72h。Dynabe