人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究.pdfVIP

第4卷 第 1期 器官移植 Vo1．4 No．1 2013年 1月 OrganTransplantation Jan．2013 · 实 验研 究 · 人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的 实验研究 李彬斌 周清 姚敏 张晓玲 秦晓艳 陈剑 摘【要】 目的 探讨人羊膜上皮细胞 (humanamnioticepithelialcell，HAEC)培养液对角膜炎 症反应的抑制作用及机制。方法 体外培养及鉴定 HAEC和兔角膜上皮细胞，制备 HAEC培养液。根 据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改 良杜氏培养基 (Dulbeeco’smodifiedEagle’S medium，DMEM)组 (DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液 1：1混合组 (混合组)、HAEC培养 液组 (HAEC组)。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后，用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种 培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测 HAEC培养液中自介素一1受体 拮抗剂 (interleukin一1receptorantagonist，IL一1Ra)的含量。采用实时定量聚合酶链反应 (PCR)检测 3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素 (IL)一1B信使核糖核酸 (messengerRNA，mRNA)的表 达，采用八肽胆囊收缩素 (choleeystokinin—octapeptide，CCK一8)法检测 3组细胞的增殖情况。结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL一1Ra的含量为(153．56± 0．36)ng／L，无血清DMEM对照中未检出IL一1Ra。3组培养液中，兔角膜上皮细胞的IL一18mRNA表 达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组 ，3组的IL一1BmRNA表达差异均有统计学意义 (均 为P0．05)。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后，HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高 于混合组和 DMEM组，DMEM组 的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组 (均为 P 0．05)。结论 HAEC可分泌 IL一1Ra抑制角膜上皮细胞 IL一1B的表达，减少炎症反应及移植排斥作用 ， 并促进角膜上皮细胞增殖。 【关键词l 羊膜移植；羊膜上皮细胞；角膜上皮细胞；白介素 一1；白介素 一1受体拮抗剂； 细胞增殖；炎症；免疫排斥 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445 (2013)01—0003—07 Experimentalstudyofhumanamnioticepithelialcellculturesolutiononinhibitingcornealinflammation L／Bin—bin，ZHOUQing，YAOMin，ZHANGXiao—ling，Q1NXiao—yan，CHENJian．DepartmentofOphthalmology， LaboratoryofOphthalmology，AffiliatedFirstHospitaloffinan e ，Guangzhou510630，China Correspondingauthor：CHENJian，EmaiZ：drchenj@163．corn 【Abstract】 Objective Toinvestigatetheinhibitionroleandmechanismofhumanamnioticepithelial cell(HAEC)culturesolutionon inhibitingcornealinflammation．Methods HAECandrabbitcorneal epithelialcell(RCEC)wereculturedandidentifiedinvitro．AndHAECculturesolutionwasprepared． AccordingtoV~riOUScompositionofsolutionforRCEC culture．theyweredividedintoserum-fr