噻唑烷二酮类药物干预糖尿病大鼠动脉粥样硬化的作用研究.pdfVIP

· 174 · 中国药物与临床2013年2月第 13卷第2期ChineseRemedies＆Clinics，Feburary2013，Vo1．13，No．2 噻唑烷二酮类药物干预糖尿病大鼠 动脉粥样硬化的作用研究 王维静 高东来 糖尿病 (DM)大血管病变的主要病理基础是动脉粥样硬 予每 12h皮下注射华法林 15mg ，持续5d，以及维生素 化．在动脉粥样硬化病变过程中，钙盐沉积与其有密切关系。 D，30万 uk·g一-·d一，持续 3d，为防止华法林引起出血，第 3 使骨骼中钙向动脉壁转移的最重要的影响因素是体内的骨 天开始注射维生素K。15mgk·g ·d～，持续6d，其余各组用 保护素(osteoprotegerin，OPG)，小鼠的OPG基因敲除后存在 等量生理盐水替代注射，第 9天大鼠模型建成 ；动脉粥样硬 全身骨密度下降和骨折发生率增高，还存在主动脉和肾动脉 化+噻唑烷二酮组、糖尿病+动脉粥样硬化+噻唑烷二酮组大 钙化[”。用基因重组OPG治疗可防止骨质疏松症和动脉钙化 鼠从第 10天开始给予罗格列酮 3mgk·g ·d 灌胃给药，依 的发生并逆转骨质疏松症[。本实验通过建立糖尿病及动脉 血糖情况调整剂量，控制血糖到正常范围，持续3周，其余各 粥样硬化的大鼠动物模型，观察噻唑烷二酮类药物对于糖尿 组用等量生理盐水替代。 病大鼠动脉粥样硬化的治疗作用及 OPG在动脉粥样硬化中 各组动物常规饲养 ，定期称体质量以调整用药量 ，实验 的表达变化。 第 30天用 3％戊 巴比妥钠腹腔麻醉 ．取长 10mm左右胸主 1 材料与方法 动脉，去除外膜脂肪组织后用 10％中性 甲醛固定 ，石蜡包埋 1．1 动物与试剂：健康 8周龄 SD大鼠36只，清洁型．体质 后切片，其余胸主动脉用去离子水冲掉残存在动脉腔及表面 量200—250g，由山西医科大学动物实验中心提供 [批号为 血液 ，迅速置于干净EP管中，一70℃冰箱冻存 ，按不同的检 SCXK(晋)2009．0001]。华法林购于上海信宜药厂有限公司， 测要求处理进行检测。 维生素 K购于上海第一生化药业有限公司，维生素 D购 自 1．3 VonKossa染色：石蜡切片脱蜡至水，2％硝酸银水溶液 上海通用药业有限公司，链脲佐菌素 (srIZ)干粉购于美国 浸染，良好的太阳光下照射 30min，蒸馏水冲洗3min，3％硫 Sigma公司；OPG一抗 (羊抗鼠)、二抗 (羊抗兔)及封闭液购 代硫酸水溶液浸染5min，再次用蒸馏水冲洗 3min，5％碱性 自北京博奥森公司；反转录及聚合酶链反应 (PCR)试剂购自 品红复染2min，经脱水、透明、树胶封片。显微镜下观察动脉 TAKARA公司，其余试剂均为市售分析纯产品；碱性磷酸酶 钙化。 (ALP)活性测定试剂盒、钙离子测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白 1．4 胸主动脉钙沉积含量测定：取约 1Omg胸主动脉用4℃ 测定试剂盒购 自南京建成科技有限公司。 的去离子水冲洗，在6O℃的恒温箱中烤至质量恒定，加人 1．2 实验分组及糖尿病模型、血管钙化模型的制备：标准饲 65％的浓硝酸4ml，72％的高氯酸 1ml，室温消化 12h后，将 料适应性喂养 1周后随机平均分为6组 ．每组 6只：空白对 消化管放于 自控电热消化器上 。120oC消化至酸全部挥发，管 照组、单纯糖尿病组、单纯动脉粥样硬化组、糖尿病+动脉粥 底析出白色结晶，冷却后加入去离子水，定容至5rnl，按照钙 样硬化组、动脉粥样硬化+噻唑烷二酮组、糖尿病+动脉粥样 离子测定试剂盒说明书，采用钙离子在碱性溶液中与甲基百 硬化+噻唑烷二酮组。 里香酚蓝结合 ，生成蓝色络合物 ，通过比色与同样处理的钙 以开始