猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用.pdfVIP

中国动物检疫 2011年第28卷第 1O期 一31一 猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒 荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用 王慧珊 一，高志强 ，王金宝 ，张鹤晓 ，乔彩霞 ，吴亚琼 ，邢佑尚 ，朱淑芬 (1．青岛农业大学动物科技学院，山东青岛，266109；2．北京出入境检验检疫局，北京通州，101113； 3．山东省农业科学院，山东济南，250100；4．山东农业大学，山东泰安，271018) 摘 要 本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEv)N基因和s基因保守区序列设计合成了两对引物和探针， 通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化，建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列 密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明，所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感， 检测时限3个小时以内，具有很好的特异性和重复性。通过对 39份临床样品进行检测，结果表明所建立的检测方法直接检测样品 中猪传染性 胃肠炎病毒。 关键词：猪传染性 胃肠炎病毒；猪呼吸道冠状病毒；荧光RT-PCR； 中图分类号：$852．651 文献标识码：A 文章编号：1005．944X (2011)10．0031-04 Esta1，Ⅱ m舶tmidAppli~tionofa qM眦Real-timeRT-PCRAssayfor theDe c0nofTramHmius~leGastroentefitisVLmSandPorcineResptrat~ Coronavirus WangHuishan，2 GaoZhiqiang，WangJinbao，ZhnagHexiao，QiaoCaixia2，WuYaqiong，XingYoushnag，ZhuShufen (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao，Shandong，266109；2．BeijingEntry。 ExitInspectionnadQuarantineBureau，TongzhouDistrict，Beijing，China，101113；3．ShandongAcademyofAgriculturalSciences， Jinan，Shandong，250100；4．ShnadongAgriculturalUniversiyt，Taina，Shnadong，271018) Abst阳 ： TheprobesnadprimersweredesignednadsynthesizedbasedontheconservedgeneNandSoftransmissiblegastroenteritis virus(TGEV) availableinGenBank， andthereactionparameterswereoptimizedtodevelopasensitiveTaqMan—basedreal—time I PCRassayfortherapiddetectionofTGEV TheassaycoulddifferentiateTGEV from porcinerespiratorycoronavirus (PRCV) eriectively．CompraedwithnormalRr-PCR， thedevelopedI PCR wasfastnadsensitive， withthedetectiontimelessthan3hours． Andthespecificiyt andreproducibilityoftheassaywerevery good．Bydetecting39clinicalsamples， theresultssuggestedhtathte methodcouldbeusedtodetectTGEV insampleseffectively． K ： trnasmissiblegastroenteritisvirusofswine；porcinerespiratory coronavirus；real-timeRT-PCR；