RORγt基因启动子的鉴定和特征分析.pdfVIP

免疫学杂志 2013年 1月 第 29卷 第 1期 IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.29 No. 1 Jan.2013 ? 28? ? 论 著? [文章编号] 1000-8861( 2013) 01-0028-05 ROR γ t 基因启动子的鉴定和特征分析 * 杨 丽 霞 , 黄朝峰 摘 要 目的以 转录起始位点 ’上游 基因序列为研究对象,初步鉴定分析是否存在 单独的启动子, 并 [ ] ROR γ t 5 4.8 kb ROR γ t 且探讨β -Cat/neni Tcf1 信号途经对ROR γ t 启动子转录活性的影响。 方法用带有不同长度的5’上游基因的5个报告质粒,与pSV-40- lla reni Luc 共转染 Jurkat 、 EL-4 、 NIH 3T3 和 293T细胞系,与报告质粒的空载相比较,根据荧光强度的相对值的大小确定启动子存 在的可能性和所在的位置; 利用野生型β -Catneni 、 激活突变型β -Catneni 和 Tcf1 表达质粒及 ROR γ t 启动子报告载体共转染, 观察 β -Cat/neni Tcf1 信号途径对 ROR γ t 启动子活性的影响。 结果不同长度的启动子报告质粒在 Jurkat 、 EL-4 、 NIH 3T3 和 293T细胞 中均呈现启动子活性, 其中所有报告质粒在 Juakat 和 EL-4 等 T细胞系中的活性均高于其他 2个上皮细胞系, 而 ROR γ t 上游 0.5 kb 的报告质粒启动子活性在所有的细胞系中均呈最高活性。 野生型β -Catneni 、 激活突变型β -Catneni 和 Tcf1 对 ROR γ t 启动 子报告有强激活作用。 结论 ROR γ t 转录表达由独立启动子控制, β -Cat/neni Tcf1 信号途径能够增强该启动子的转录活性。 关键词 ; 启动子分析; 转录调控; 信号途径 [ ] ROR γ t β -Cat/neni Tcf1 中图分类号 文献标识码 [ ] R392.9 [ ] A Identification and characteristic analysis of ROR γ t gene promoter region * Institute of Human ,Virology Zhongshan School of Medicin,e Sun - Yat sen ,University Guangzhou 510080, China *Corresponding Author: HUANG ,Zhaofeng E-:mail huangzhaofeng@gmai.l com ]tractAbs[ In this , study we would like to identify and analyze the promoter characters of ROR γ t gene 5 ’- flanking , region and to reveal the transcriptional regulation of ROR γ t geneexpression Five reporter vectors containing different fragments of ROR γ t gene 5 ’-flanking region in pGL-3 luciferase were co-transfected with pSV-40-renilla Luciferase reporter vector into Jurkat, EL-4, NIH 3T3 and 293Tcells Promoter activity has been measured and compared to the blank reporter vector in differentcells Our studies demonstrated that these regions displayed higher promoter activity in T cel- l derived EL-4 and Jurkat cell than that in non-T cell derived 293T and NIH 3T3 , cells and the relative promoter activity of pGL3-pROR γ t-0.5 kb was the highest in allcells The result implied that ROR γ t gene expression could be regulated by a potential promo