ELISPOT及FACS在慢性乙型肝炎病毒感染者细胞免疫功能检测中的应用.pdfVIP

《现代免疫学))2009年第 29卷第 5期 ELISPOT及 FAGS在慢性乙型肝炎病毒感染者细胞免疫功能 检测中的应用 丛丽媛 ，吴庆军 ，李芸。，杨海燕 ，谢锐姬 ，杨富强 (1．解放军第 四五八医院肝病研究所免疫缺陷病研究与特殊实验 中心， 广州 510600；2．达科为生物技术有限公司，深 f 518054) 摘要 ：为探讨 HBV感染者特异性细胞免疫功能的差异，选取 以流感多肽刺激健康人外周血单个核细胞(PBMC)，采用 EI』1sP0T法检测其 PBMC中 IFN一7分泌细胞 的数量。在以流感多肽为刺激物建立的流感质控细胞库的调控下，以HBV核 心抗原为刺激物 ，检测表面抗体阳性的 HBV感染者 (A组)、e抗原阳性的慢性 HBV携带者 (B组)、e抗原阴性的慢性 HBV携带者(c组)三类研究对象的 IFN一7分泌细胞数量 。同时，采用 FACS方法对 A、B、c组分别进行 T淋 巴细胞亚群 及调节性 T细胞 (Treg)检测 。发现 A与 B、c组相 比，斑点形成细胞数 (SFC)／10。PBMC明显减少 (P一0．000及 P一0． 022)，C组斑点形成细胞数显著多于 B组 (P--0．000)。FACS检测结果 A组 CD4 T细胞数量及 cD4／cD8比值 A组显著 高于B、c组，而Treg数量B组显著高于 A、c组 。表明通过ELISPOT及 FACS对 乙肝病毒感染者外周血T细胞进行数量上 和功能上的研究，能够深入 了解体机体的免疫状态 ，从而为临床治疗及判定疾病的发展、转归提供理论依据。 关键词 ：乙型肝炎 ；细胞免疫 ；酶联免疫斑 点 ；流式细胞术 中图号 ：R392—33 文献识别码 ：A 文章编号 2009)05—0409—04 乙型肝炎是 由乙型肝炎病毒 (HBV)引起 的， (抗 HBs阳性，抗一HBc阳性)14例 ，平均年龄 呈世界性分布 。目前全球约有 3亿 HBV感染者 ， (20．86±1．35)岁 ；B组为 HBeAg阳性慢性 HBV 我国为 HBV感染 的高流行 区_1]。乙型肝炎 已成 携带者 14例 ，平均年龄 (19．79±0．89)岁 ；C组包 为我 国重 要 的公 共卫 生 问题之 一。乙肝 病毒 括 HBeAg阴性慢性 HBV携带者 14例 ，平均年龄 (HBV)感染 的临床多种表现形式和转归主要取决 (20．36±0．63)岁 ，病例选取参照 2005年 12月中 于感染者体内所产生的抗病毒免疫 的强度及活跃程 华 医学会肝病学分会 、中华医学会感染病学分会联 度，这种免疫应答包括体液免疫和细胞免疫 。大部 合制订 《慢性乙型肝炎防治指南 》_E]。三组研究对象 分成年人感染 HBV后表现为急性、 自限性病程 ， 年龄经统计无显著性差异 。正常标本取 自健康体检 机体能够 自动清除体 内HBV；而只有部分感染者 人群 ，所 有 研 究 对 象 均 排 除 HAV、HCV、 发展成为慢性携带者 ，HBV在体 内持续复制 ，并 HDV、HEV、HIV重叠感染 。 最终发展成为肝硬化及肝癌。细胞免疫水平在乙肝 1．2 试 验试 剂及器材 ELISPOT试剂盒 、流感 的发展进程中起重要作用口“]。本文对 HBV 感染 多肽及 HBV核心蛋白、淋 巴细胞分离液、细胞冻 者细胞免疫进行研究 ，探讨 HBV感染者细胞免疫 存试剂盒等均 由达科为生物技术有 限公司提供。 对疾病 的发展的影响。 CD4、CD8、CD3抗体及 CD CD25 (高表达) CD127一CD4：FITC标记 鼠抗人单抗 、CD25：PF 1 材料与方法 标记鼠抗人单抗 、CD127：AlexaFluor@647标记 1．1 研究对象 56份样本包括正常标本 14份 ， 鼠抗人单抗均购 自BD公司。ChampSpotⅡ酶联斑 HBV感染者血液标本 42份。HBV感