大鼠ANT1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备.pdf

第四军 大学学报 (JFourthMilMedUniv)2009，30(22 hl【； ：flT1 ．! 2275 · 研究原著 · 文章编号：1000-2790(2009)21-2275-03 大 鼠ANT1蛋 白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备 孟喜君，李传坤，王茂德，谢万福 (西安交通大学医学院第一附属医院神经外科，陕西西安710061) Expression，purification ofratANT1 杆菌中表达了Mr约为 32×10 的 目的蛋 白；亲和层析纯化后 免疫的新西兰大白兔获得其多克隆抗体；曝光后胶片上均可 protein and preparation of its 见Mr32x10 的阳性条带，与纯化的大鼠ANT1重组蛋 白处 polyclonalantibody 于同一水平，表明纯化的抗 ANT多克隆抗体具有高度的特异 MENGXi—Jun．LIChll,an—Kun，WANGMao一 。XIEWan—Fu 性．结论：利用基因重组技术 ，在大肠杆菌中成功表达了大 鼠 DepartmentofNeurosurgery，FirstAffiliated Hospital，Medical ANT1融合蛋白并制备了其多克隆抗体，为研究腺苷酸转运体 School，Xi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061，China 蛋白在癫痫发病过程中的作用机制奠定了基础． 【关键词】原核表达；多克隆抗体；腺苷酸转运体 1 A【bstract】AIM：Toexpressandpurifytheadeninenucleotide 【中图号】Q78 【文献标示码】A transporteprotein (ANT1)andtoprepareitspolyclonalnatibody． METHODS：TheCDSofANT1wasamplifiedbyPCR from rat， O 引言 andthensubcloned intoprokaryoticexpression vectorpET28a ， 腺苷酸转运体 1(adeninenucleotidetransporte aftertransformedwiththevector，theBI21(DE3)stainswere protein，ANT1)是线粒体 内膜最丰富的蛋 白质 ¨． inducedbyIPTG．TheexpressionproductwaspurifiedbyNi“一 ANT1是线粒体通透陛转换孔 (permeabilitytransition． NTA ion exchangeresin． Thepurified protein wasanalyzed by SDS—PAGE，andthen immunedtheNew Zealandwhiterabbitsto pore，PTP)的重要组成成分 J．正常情况下可维持线 prepraenatibody．Thepolyclonal natibodywasreceivedbyAffinity 粒体基质和胞质之间渗透压梯度．当细胞受到促凋 purificationrfom rabbitserum．Theprepareantibodywasusedin 亡刺激或信号时，则从胞质向线粒体膜移动，从而导 sample assay by W estern Blot． RESULTS：The expression 致严重的代谢障碍 J．研究 显示，线粒体异常与 plasmid pET28a—ANT1 was constructed su