家蚕Bmugt 3基因cDNA序列的克隆、表达与序列分析.pdfVIP

第 37卷 第 11期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．37 No．11 JournalofNorthwestAFUniversity(Nat．Sci．Ed 2009年 l1月 ． ) NOV．2009 家蚕 Bmugt3基 因eDNA序列的克隆、表达 与序列分析 孔卫青，杨金宏 (安康学院 陕西省蚕桑重点实验室 ，陕西 安康 725000) [摘 要] 【目的】克隆分析家蚕 Bmugt3基因cDNA序列，并对其在家蚕不同组织中的表达进行检测。 【方 法】以家蚕akl和 873为供试材料 ，采用生物信息学方法和 RT—PCR技术 ，对家蚕Bmugt3基因cDNA序列进行克隆 和组织表达谱研究 ，并通过 Xba I和 Hind III双酶切重组质粒 ，将 Bmugt3亚克隆至具有 2个反 向T7启动子 ，用于 体外诱导合成双链 RNA(dsRNA)的 1A440载体。 【结果】克隆得到了家蚕 Bmugt3基因 1675bp的cDNA序列，编 码 462个氨基酸，编码蛋 白的分子质量为 52．3ku，等电点 6．5；多序列 比对显示 ，Bmugt3基 因缺失了c末端 的跨膜 结构域 ；聚类分析结果显示 ，其与家蚕 phenol—UGT基 因聚合在 同一分支上 。Bmugt3基 因主要在家蚕丝腺 中表达 。 【结论1Bmugt3基因是组织特异性表达基因，可能在家蚕类黄酮素的代谢 中起作用。 [关键词] 家蚕 ；Bmugt3；克隆；组织表达 [中图分类号] $881．2 4 [文献标识码] A [文章编号] 1671-9387(2009)l1—0019-06 Cloning，expressionand sequenceanalysisofcDNA encoding thesilkworm Bmugt3gene KONG W ei—qing，YANGJin～hong (KeySericulturalLaboratoryofShaanxi，AnkangUniversity，Ankang，Shaanxi725000，China) Abstract：[Objective]ThestudywastocloneandanalyzethecDNA sequenceofsilkworm Bmugt3 geneandtheexpressionin5tissues．[Method]Usingsilkworm strain，akland873，asmaterials，thecDNA sequenceofBrnugt3genewasclonedbyRT—PCR andanalyzedbybioinformatics．Thegenewassubcloned toIA440vector，whichhad twoT7polymerasepromoterin oppositeorientation to synthesizedsRNA in vitro，throughdouble—digestionwithXba I andHindm．[Result]Bmugt3geneofsilkworm with1675 bDinlengthwascloned．426aminoacidswerecodedandtheM W andpIofthepredictedproteinwas52．3 kuand6．5respectively．Bmugt3hadnoC—endtransmembranedomainbythemultiplesequencealignment anditclustered in thesamebranchwith silkworm phenol—UGT in theclusteringanalysis．TheBmugt3 ge