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第6卷第5期 南 方 水 产 Vo1．6．No．5
2010年10月 SouthChinaFisheriesScience 0ct．．2010
doi：10．3969／j．issn．1673—2227．2010．05．O11
· 研究简报 ·
基于正交试验设计优化三疣梭子蟹 SRAP—PCR反应体系
胡则辉，徐君卓，王跃斌，柴学军
(浙江省海洋水产研究所 ，浙江省海水增养殖重点实验室，浙江 舟山316100)
摘要：相关序列扩增多态性 (sequencerelatedamplifiedpolymorphism，SRAP)是一种多态性高的新型分子标记 ，
其扩增结果稳定，容易操作和引物通用性高，在遗传多样性分析、种质鉴定和遗传图谱构建等方面的广泛应用
逐渐从植物转移到水产动物中。为了建立三疣梭子蟹 (Portunnstrituberculatns)SRAP技术体系，文章利用正交
设计 L。(4)对三疣梭子蟹SRAP—PCR反应体系的5因素 [TaqDNA聚合酶、镁离子 (Mg2)、模板、三磷酸脱
氧核苷 (dNTPs)和引物]在4个水平上进行优化试验，结果得出各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小
依次为模板 (纯度 1．75～1．90，质量浓度 10～70ng·txL。。)，Mg2 (1．60—2．00mmol·L )，dNTPs(0．10～
0．40mmolL· )，TaqDNA聚合酶 (0．50～2．00U)和引物 (0．10～0．40txmolL· )；筛选出各反应因素的最佳
水平，建立三疣梭子蟹SRAP—PCR反应的最佳体系 (25 )为 TaqDNA聚合酶0．50U，Mg22．20mmolL·一，
模板 DNA10ng，dNTPs0．20mmol·L～，引物0．20I~mol-L一。这一优化体系可望在三疣梭子蟹遗传多样性和性
别连锁标记等研究中应用。
关键词：三疣梭子蟹；SRAP；正交设计；优化
中图分类号：S917 文献标志码：A 文章编号：1673—2227一 (2010)05—0068—06
OptimizationofSRAP-PCR system forPortunustrituberculatus
basedonorthogonalexperimentaldesign
HUZehui，XUJunzhuo，WANGYuebin，CHAIXuejun
(ZhejiangKeyLab．ofMaricuhureEnhancement，ZhejiangMarineFisheriesResearchInstitute，Zhoushan316100，China)
Abstract：SRAPisanovelmolecularmarkerwithhighpolymorphism．Itisreliableinamplification，easytooperateandhasahighu—
niversalityinprimerpairs．SRAPtechniquehasbeenwidelyusedforstudiesfrom plantstOaquaticanimalsinthefieldsofgeneticdi—
versity，germplasm identification，geneticmapconstructionandSOon．Basedonanorthogonalexperimentaldesign，weoptimizedthe
fivefactorsofSRAP—PCRamplificationsystemofrPortunustntuberculatus(TaqDNApolymerase，Mg2 template，dNTPsandprimer)
fromfourlevels．TheresultsshowthattheeffectsofthesefactorsonPCRreactionfromstrongtoweakisasfollow
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