毕赤酵母中表达透明颤菌血红蛋白提高重组脂肪酶的表达.pdfVIP

生 物 工 程 学报 ChinJBiotech2011，December25；27(12)：1755—1764 journals．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im．ac．cn ~2011CJB，Allrightsreserved． 毕赤酵母中表达透明颤菌血红蛋白提高重组 脂肪酶的表达 汪小锋，孙永川，申旭光，柯锋，徐莉，刘云，闰云君 华中科技大学生命科学与技术学院 教育部分子生物物理重点实验室，武汉 430074 摘 要：解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2(Y1Lip2)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了改善高密度发酵生产Y1Lip2 过程中的溶氧限制，提高Y1Lip2的表达量，将 Y1Lip2基因lip2和透明颤菌血红蛋白 (VHb)基因vgb分别置于AOX1 启动子和PsADH2启动子的调控之下，进行Y1Lip2和 VHb在毕赤酵母 中的共表达。PsADH2启动子来源于树干毕赤酵 母 Pichiasapitis，在低氧条件下能被激活。SDS．PAGE和CO．差式光谱分析表明，Y1Lip2和VHb在重组菌中成功实现 了共表达。在氧限制性条件下，VHb表达的细胞 fVHb，GS115／9Klip2．pZPVT)与对照细胞 (VHb一，GS115／9Klip2)相 比，摇瓶和 10L发酵罐中Y1Lip2表达量分别提高了25％和83％。此外，在低氧条件下，VHb细胞在 l0L发酵罐中 的生物量也 比 VHb一细胞 高 文 中也 获得 了一株表 达 了 VHb 的并携 带有 多个 坳2基 因拷 92的克隆子 GS115／9Klip2一pZPVTlip249#，在低氧条件下，该克隆子在 10L发酵罐中的最高脂肪酶水解活力达 33900U／mL。因此， 在毕赤酵母中用PsADH2启动子表达VHb，同时增加 ，2基因的拷贝数是提高Y1Lip2表达量的一种有效策略。 关键词：脂肪酶，透 明颤菌血红蛋 白，PsADH2启动子，解脂耶氏酵母，毕赤酵母，表达 Expression0fVitreoscillahemoglobinimprovesrecombinant lli●oaseproaucti·●on i●nF…ICht-apastort-s XiaofengWang，YongchuanSun，XuguangShen，FengKe，LiXu，YunLiu，andYunjunYan KeyLaboratoryofMolecularBio-physics，CollegeofLlyeScienceandTechnoiogy，HuazhongUniversityofScienceandTechnoiogy，Wuhan430074， China Abstract：YarrowialipolyticalipaseLip2(Y1Lip2)isanimportantindustrialenzymewithmanypotentialapplications．To alleviatethedissolvedoxygen(DO)limitationandimproveY1Lip2productionduringhigh。celldensityfermentation，the Y1Lip2genelip2andVitreoscillahemoglobin(VHb)genevgbwereco-expressedinPichiapastorisunderthecontrolofAOX1 Received：June17，201l：Accepted：September6，20l1 Supportedby：NationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgram ofChina(863Program)(Nos．2009AA03Z232，2010AA1015o1)， Program forNew CenturyExcellentTalentsinUniversity(No．NCET-07—0336)，NaturalScienceFoundationofHubeiProvince，China(No． 2009CDA046)． Correspondingauthor：VunjunYan．Tel／Fax：+86—27—