含hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒的构建及其功能鉴定.pdfVIP

苏州大学学报(医学版)2011；31(6) 883 含 hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒的构建及其功能鉴定 胡群超 ，周俊东 ，顾 科 ，吴锦 昌 (1．苏州大学医学部 放射医学与防护学院，放射生物学教研室，江苏苏州215123；2．苏州市立医院东区放疗科，江苏 苏州215001) 摘要：目的 构建乏氧应答启动子调控的人钠／碘共同转运体 (hNIS)报告基因重组质粒，为实体瘤微环境乏氧 的实时监测提供研究基础。方法 合成乏氧反应元件 (HRE)的核苷酸片段 ，克隆人 pGL3一promoter，构建为pGL3一 promoter-5XHRE载体。然后将扩增 的hNIS基 因插入 pGL3一promoter-5×HRE载体中，构建为pGL3一promoter一5× HRE—NIS重组质粒并进行测序验证。以DMSO处理组作为对照，CoC1处理 HEK293细胞模拟乏氧；将经验证的 pShuttle．NIS质粒转染HEK293乏氧细胞，同时将构建的pcDNA3．1一HIF一1仅质粒和pShuttle—NIS质粒按照3：1比例转 染 HEK293细胞，转染空质粒pcDNA3．1和pShuttle．NIS质粒组作为对照。通过qRT—PCR法检测 hNIS基因表达的 变化。并用高锝酸盐( Tc04)处理双质粒共转染的HEK293细胞，洗脱游离 Tc04后通过 计数器采集细胞放 射性计数 ，检测所表达 NIS蛋白的功能。结果 克隆的基因产物与预期一致 ，序列无碱基的突变。共转染 HIF-1ot 质粒组及转染 pShuttle．NIS的CoC1处理组，其 hNISmRNA的表达量显著高于转染空质粒及DMSO处理组 (均P 0．O1)。共转染HIF—lot质粒组细胞的 Tc04-摄取率显著高于空质粒对照组 (P0．01)。结论 pGL3一promoter-5X HRE．NIS重组质粒转染后能介导细胞摄取 TcO4-，为微环境细胞乏氧的核素显像提供实验依据。 关键词：钠／碘转运体；报告基因；乏氧；放射性核素；乏氧诱导因子一1 中图分类号：R392．2；R730．231 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2011)06—0883—05 TheConstruction and IdentificationofHypoxia-regulatedRecombinant PlasmidwithReporterGenehNIS HUQun—chao一，ZHOUJun．dong，GUKe， fin—chang， (1．DeptofRadiobiology，SchoolofRadiationMedicineandProtection，MedicalCollege，Soochow University，JiangsuSuzhou215123，China；2．DeptofRadiationOncology，SuzhouMunicipalHospital EastBranch，JiangsuSuzhou215001，China) Abstract：Objective ToconstructpShuttle-5XHRE—CMV—NISrecombinantplasmidregulatedby hypoxia—responsiveelement，which can possibly beused to detectthe expression ofhypoxia induced factor-1 (HIF一1 )geneunderhypoxiacondition．Methods Artificiallysynthesizethenucleotide sequencesoffivecopiesofhypoxiaresponseelements(HREs)wereclonedintopGL3一promotervectorto consturctpGL3p·romote