链球菌G蛋白IgG结合域（GBx）的融合表达及其IgG结合活性的比较分析.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2009，29(10)：64～68 链球菌 G蛋白IgG结合域 (GBx)的融合表达 及其 IgG结合活性的比较分析 黄雪年 许 杨 李燕萍 (南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 南昌大学中德联合研究院 南昌 330047) 摘要 链球菌G蛋白的IgG结合域能够特异性地结合 IgG的Fc区，是制备免疫微阵列的一种理 想的IgG固定材料。克隆表达了具有 IgG结合活性的3种 IgG结合域的GST融合蛋 白(GST— GBx)，该3种蛋 白分别含有 1个、2个和 3个IgG结合域。采用ELISA对三蛋 白IgG结合能力进 行了比较分析。结果表 明在含B—Domain的量相 同的情况下，GST-GB3蛋白固定 IgG的量最多，其 次为 GST．GB2，GST—GB1最弱；对 IgG的灵敏度也是 GST—GB3最强，GST．GB1最弱 ，提示GST．GB3 固定 IgG的能力较其他两蛋 白具有明显优势。 关键词 链球菌G蛋 白 IgG结合域 GST融合蛋白 IgG结合能力 ELISA 中图分类号 Q819 抗体分子与靶抗原之间的结合具有特异性强、亲和 固定 IgG，例如使用带电荷的基底物质和 IgG受体蛋白 力高的特点，通过将抗体分子固定在多种固体材料表面 等 。金 黄 色 葡 萄球 菌 A 蛋 白 (Staphylococcal 的方式捕捉抗原，在药物筛选、蛋 白纯化、诊断分析和免 ProteinA，SPA)和链球菌 G蛋 白(StreptococcalProtein 疫传感器等领域都有广泛的应用。在免疫微阵列制备过 G，SPG)分别是 IgG的 I型和 Ⅲ受体蛋白，两者都能 程 中，抗体的固定化是至关重要的环节。研究表明，当抗 选择性地结合 IgG的Fc区，其中SPG的IgG结合谱更 体固定化在固体表面后，它们的活性往往比溶液中抗体 广，亲和力也更高 。因此，用 IgG受体蛋白定向固定 分子的活性低。其中一个主要影响因素是固定化抗体分 抗体有望成为一种实际可行的抗体 固定化方法。用 子的随机趋向性和较大的空间位阻，影响了抗原一抗体反 IgG受体蛋白固定抗体，通常先将 IgG受体蛋白覆盖在 应，另一个主要原因是抗体分子的构象发生改变，导致部 载体表面上，然后通过特异性地结合 IgG分子的Fc端 分变性…。目前抗体的固定方法主要有物理吸附法和化 将 IgG分子固定在受体蛋白层上。文献报道，通过受 学共价交联法 ，用这两种方法固定抗体，在固定结合过 体分子固定的 IgG具有更好的固定化取向，更有利于 程中抗体的 Fab端有可能被掩盖而失去结合抗原的能 捕获抗原，可以提高检测的灵敏度”’。 力，很多固定化的抗体分子其实是无效的。而且用物理 SPG是 G、C群链球菌的一种细胞壁表面蛋 白，通 吸附法固定的抗体在分析过程中很容易被洗脱，从而降 常含有 2个或3个 IgG结合结构域 (B—Domain)，就是 低了应用时的灵敏度和重复性。因此，寻找一种好的抗 这个 B—Domain能特异性结合 IgG的Fc端的 C2一c3 体固定化技术是非常有必要的。 区。我们将含有 1个 B—Domain的蛋白称为 GB1，含有 目前已经有多种抗体固定化技术，理想的固定化 2个的称为 GB2，同理含有 3个的称 为 GB3 。B． 技术应该实现抗体的定向固定。通过将 IgG的 Fc端 Domain序列是高度同源的，都含有 55个氨基酸残基， 固定在载体上，使得 Fab端从载体的表面充分向空间 每两个B—Domain之间由15个氨基酸形成的无规则卷 展示，这样更有利于抗体捕捉周围的抗原。这一点对 曲连