辛伐他汀对大鼠BMSCs成骨诱导Wnt信号传导通路相关因子mRNA表达的影响.pdfVIP

中国修复重建外科杂志2009年11月第23卷第l1期 · 137l· 辛伐他汀对大鼠BMSCs成骨诱导Writ信号传导通路 相关因子mRNA表达的影响 张磊 张柳 田发明 韩大成 牛军强 刘晓宁 【摘 要】 目的 探讨辛伐他汀 (simvastatin，SIM)对大 鼠BMSCs成骨分化过程中Wnt信号传导通路相关因 子mRNA表达的影响，研究SIM促进BMSCs成骨分化的作用机制。 方法 取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨骨髓 细胞，全骨髓培养法进行原代和传代培养。取第 2代细胞换用成骨诱导培养基培养，并将细胞分为 2组，实验组加入 1× 10 molL／SIM，对照组加入等量无水乙醇和PBS。诱导培养 7d倒置相差显微镜观察两组细胞形态，并行ALP染色观察； 培养28d行vonKossa染色观察ECM 矿化；培养7、14d采用实时定量PCR检测Wnt信号传导通路相关因子Axin2、 13一catenin、骨钙素 (osteocalcin，OC)、rfizzled一2、Lef-1、Wnt5amRNA的表达。 结果 诱导培养7d倒置相差显微镜观 察显示，实验组以多边形和三角形细胞居多；对照组细胞多呈长梭形，少数为小圆形或三角形。诱导培养7dALP染色观 察显示，实验组细胞质中出现蓝染的ALP，阳性染色细胞和区域明显多于对照组；培养28dvonKossa染色观察显示，两 组细胞均可见点状及片状钙沉积，与对照组相比，实验组钙沉积明显增多。实时定量PCR检测显示，诱导培养7d，实验 组Axin2mRNA表达水平显著低于对照组，frizzled．2、Lef-1mRNA表达水平显著高于对照组，差异均有统计学意义 (尸 0．05)；其余各因子mRNA表达两组差异无统计学意义 (P0．05)；培养 14d，实验组除B．catenin外，其余各因子mRNA 表达水平均显著高于对照组 (尸0．05)。 结论 SIM 可促进BMSCs向成骨细胞分化，并伴 Wnt信号途径相关因子 mRNA表达水平 的改变 。 【关键词】 BMSCs 成骨诱导分化 Wnt信号传导通路 辛伐他汀 大 鼠 中图分类号：Q813 R3l8 文献标志码：A EFFECTOFSIM、ASTATINONmRNAEXPRESSIoNSOFSOMECOMPONENTSOFWntSIGNALING PATH、l『 lN DIFFERENTIATION PR0CESS 0F0STE0BLASTSDERIVED FROM BMSCsOFRATS／ZH_ANGLei,ZHdNGLiu， TIANFaming,HANDacheng,NIU]unqiang,LIUXiaoning．DepartmentofOrthopaedics,AffiliatedHospitalof。NorthChinaCoal M edicalCollege,TangshanHebei,063000，PR．China．Correspondingauthor：ZHANGLiu,E—mail：zhliul30@sohu．corn 【Abstract1 Objective Toconfirm thestimulatingeffectofsimvastatinonBMSCsofSDratsosteogenic differentiation，andtofurtherstudytheroleofW ntsignalingpathwayinthisprocess． Methods BM SCsderivedrfom thetibiaandfemurof6-week—oldfemaleSD ratswereculturedinvitro．Twogroupswereestablished：controlgroupand experimentalgroup．Afterthe2ndpassage，thecellsofexperimentalgroupweretreate