泥鳅MnSOD基因的电子克隆及序列分析.pdfVIP

2011年 21(5) 生 物 技 术 5 泥鳅 MnSOD基因的电子克隆及序列分析 陈国强，陈忠翔，王萍 (淮海工学院海洋学院，江苏省海洋生物技术重点实验室 ，江苏 连云港 222005) 摘要：目的：电子克隆并分析泥鳅MnSOD基因。方法：通过电子克隆泥鳅MnSOD基因的开放阅读框，并对其氨基酸组成 、功 能结构域、系统进化、信号肽、二级结构、三级结构等信息进行预测分析。结果：通过电子克隆获得泥鳅MnSOD基因的cDNA。该 基因的开放阅读框大小为675bp，编码224个氨基酸残基，推导的蛋白质分子量为25kDa，等电点约为8．41，其编码序列与其他物 种相比非常保守，与鲤形 目淡水鱼的MnSOD在进化上亲缘关系最近。其N端含转运肽 ，推测它定位于线粒体中。预测泥鳅 Mn- SOD的二级结构及三级结构含有较多的不规则卷曲和0t螺旋，其N端为两个长的反平行螺旋 ，C端则为含有拧成三股折叠片的 +31结构。结论：该研究为泥鳅进一步的分子生物学及抗氧化研究奠定了基础。 关键词：泥鳅 ；MnSOD；电子克隆；序列分析 中图分类号：Q786 文献标识码 ：A doi：10．3969／j．issn．1004—311X．2011．05．114 ／nSilicoCloningandSequenceAnalysisofMnSOD Genefrom Misgurnusanguillicaudatus CHEN Guo—qiang，CHEN Zhong—xiang，WANG Ping (CollegeofMarineScience，JiangsuKeyLaboratoryofMarineBioteehnology，HuaihaiInstituteofTechnology，Lianyugang222005，China) Abstract：Objective：TheMnSODgenefromMisgurnusanguillicaudatuswasclonedbyinsilicotechnique．Method：TheMnSODgene wasclonedbyinsilicotechnique．Thesequencewasanalyzedbybioinformatictoolstopredictcompositionofaminoacid，domain，phyloge- netictree，signalpeptide，secondarystructure，tertiarystructure，andSOon．Result：TheresultshowedthatthecDNA containedanORF withthelongestlengthof675bp，andencoding224aminoacids．ThemolecularweightandpIofdeducedproteinis25kDanad8．41．The primarystructureofitwashighlyconserved，andthephylogenetictreedisplayedthattherelationshipbetweenMnSOD rfom Misgurnusan— guillicaudatusandothersrfom CypriniofrmesWas mostclosely．itwaslocatedinmitochondrionsincetheN —terminal ofitcontainedatran— sitpeptide．Thesecondary andtertiarystructuresindicatedthatitcontainedmorerandom coiland仪 helix．andN—terminalofithadtwo longnati—parallelhelixs，whileC—terminalofitwasaot+Bstructurewhichcontainedthreeplatedsheets．Conclusion：Theresultwill lay