一种糖生物传感芯片制备的新方法.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 3 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 266～270 一种糖生物传感芯片制备的新方法 李福川　戚　欣　耿美玉 ( 中国海洋大学海洋药物与食品研究所 ,青岛 266003) 摘 　要 　建立了一种用于 SPR 生物传感器分析的糖生物传感芯片制备新方法。在己二胺大量过量的情况 下 ,海洋硫酸多糖 911 还原末端的半缩醛基与己二胺的一个氨基进行还原胺化反应 ,引入一个伯氨基 ,该伯氨 基进一步与 sulfoNHSbiotin 反应 ,使 911 的还原末端生物素化 ,通过预偶联到 CM5 芯片上的链酶抗生物素抗 体 , 以俘获法将生物素化的911 固定到芯片表面。该方法避免已有固定方法对糖内部结构的破坏 ,减少了非 特异性耦联 ,能更好的反映糖类与其它分子的相互作用特性 ,且操作简单 ,适应于多数具有还原末端的糖类。 911 经该方法固定后 ,利用 SPR 生物传感器 ,研究了其与 HIV gp120 蛋白 V3 区的相互作用动力学 ,初步证明两 者之间存在强烈的相互作用 , K 与 K 分别为 :2. 25e5 与 4. 44e - 6 。 A D 关键词 　糖 ,表面等离子体共振 ,固定 1 　引　　言 利用表面等离子体共振( ) surface plasmon resonance ,SPR 原理研制的 SPR 生物传感器 , 由于能实时灵 敏动态地检测生物大分子的相互作用 ,且无需标记样品。因此 , 自二十世纪九十年代初商品化以来已被 广泛应用于抗原与抗体、受体与配体的相互作用研究1 ～4 。糖作为一类重要的生命物质 ,尤其是多糖及 寡糖 ,在细胞及分子识别中起极其重要作用。因此 ,很早便成为 SPR 研究的对象 ,但到目前为止 ,利用 SPR 对糖类与其它分子相互作用的研究报道还很少 ,其中一个重要原因在于缺少将糖类固定到芯片上 的理想方法。目前已有的固定方法中 ,除了少数糖类可借助自身已有的氨基、羧基等活性基团进行直接 固定外 ,对多数不具有该类活性基团的糖类 ,一般采用过碘酸氧化断裂单糖残基中的邻二羟基来产生游 离醛基 , 以用于固定5 ～9 。从这些已有的糖类固定方法看 ,无论利用糖中已有的活性基团 ,还是过碘酸 氧化 ,其共同的缺点在于都破坏了糖类的内部结构 ,不利于更好反映糖与其它分子的相互作用特性。 海洋硫酸多糖 911 是本所从褐藻中提取 ,经进一步地分级纯化、化学修饰而得到的一种由甘露糖醛 酸和古罗糖醛酸聚合而成的聚阴离子直链硫酸多糖 ,平均分子量为 8000Da 。目前已被国家药品监督管 理局作为 Ⅰ类抗爱滋病药物批准进入临床研究。为了利用 SPR 深入探讨海洋硫酸多糖 911 抗 HIV 的分 子机理 ,本文建立了一种糖生物芯片制备的新方法 ,用于 911 在芯片上固定。该方法关键是避免了固定 时对糖内部结构的破坏 ,更重要的是适用于多数具有还原末端的糖类 , 是一种比较理想的用于 SPR 分 析糖生物芯片制备方法。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂 ( ) BIAcoreX 生物传感器 ; CM5 芯片 瑞典 Pharmacia Biosensor AB 公司 ;MilliQII 型纯水系统 ;Microcon