猪白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达及其生物学活性测定.pdf

第 37卷 第 11期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．37 No．11 2009年 11月 JournalofNorthwestAFUniversity(Nat．Sci．Ed．) NOV． 2009 猪 白细胞介素一2基 因在大肠杆菌中的表达 及其生物学活性测定 郭小参 ，陈红英 ，崔 沛 ，贾艳艳 ，崔保安 ，方剑玉。，王振亚 (1河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002；2河南省动物疫病预防控制中心，河南 郑州 450008； 3南京农业大学 动物 医学 院，江苏 南京 210095) [摘 要] 【目的】在大肠杆菌中表达猪 白细胞介素一2(plL2)，并鉴定其生物学活性。 【方法】以含猪 IL-2基因 的重组质粒 pGEM-pIL2为模板 ，PCR扩增 IL-2基 因。将猪 IL-2基因定 向克隆到原核表达载体 pGEX一6p一1中，转化 大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞 ，在 IPTG诱导下表达融合蛋 白GST-pIL2，并应用 甲基噻唑基 四 唑(MTT)试验测定融合蛋 白的生物学活性 。 【结果】以含有猪 IL-2基 因的重组质粒 pGEM—plL2为模板 ，PCR扩增 出 1条约420bp的带 。所获重组质粒 pGEX-pIL2经酶切 、测序鉴定 ，证实含有 目的片段 ，且连接 、构建正确 。SDS- PAGE电泳结果显示 ，可检测到相对分子质量约为 42ku的GST—pIL2，Western-blot证实 GST—plL2能与兔抗猪 IL-2 单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋 白经薄层层析扫描分析，表达量约 占菌体总蛋 白的4O 。MTT试验证实，表达 产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。 【结论】猪 IL-2基因在大肠杆菌中得到表达，表达的蛋 白具有一 定 的生物学活性 。 [关键词] 猪 白细胞介素一2；原核表达 ；生物学活性 [中图分类号] $851．31 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(20O9)l1—0001—06 Expressionofhuainanporcine interleukin一2 in Escherichia coliandbioactivityanalysis GUOXiao—can ，CHEN Hong—ying ，CUIPei，JIA Yan—yan ，CUIBao—an ， FANG Jian—yu。，WANG Zheng—ya (1CollegeofAnimalHusbandryAndVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou，Henan450002，China 2HenanCenterforAnimalDiseasesControlandPrevention，Zhengzhou，Henan450008，China； 3ColiegeorVeterinaryMedicine，NanJingAgriculturalUniversitY，Naniing，Jiangsu210095，China) Abstract：[Objective]Thisstudydevelopedprokaryoticexpressionsystem whichcanexpressporcine interleukin一2(pIL2)inEscherichiacoli，andidentifiedthebioactivityoftherecombinantprotein．[Method] PorcineIL一2genewasamplifiedwith recombinationplasmidpGEM—pII2asatemplate，porcineIL一2was clonedintotheproka