巴西橡胶树14—3—3蛋白基因的克隆及表达分析.pdfVIP

第 31卷 第 9期 热 带 作 物 学 报 Vo1．3l No．9 2010年 9月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL CROPS Sep．2010 巴西橡胶树 14—3—3蛋白基因的克隆及表达分析 李辉亮 ，郭冬 1,2，彭世清 农裹业昱部冀热雾带作物董生物技釜术粟妻重警点葬开囊放篓实验蠢霎室海碍南I半J海佴口571101 2 中国热带农业科学院科学技术处．海南海 口 571101 摘要 根据在巴西橡胶树幼态无性系与老态无性系胶乳之间差异表达的一个 SSH片段序列信息设计 引物 ．通过 RACE技术获得 了2个编码 l4—3—3蛋白的cDNA．命名为 日614—3—30和 6『14—3—36。序列分析表 明．日614—3—3口 和Hb14—3—3b基 因长度分别为 1154、1050bp，分别编码 252、263个氨基酸，分子量为 61．7Ku和64．7Ku，等 电点为 5．51和 5．14。日614—3—3ab／基 因在所检测 的组织 中均有表达 ．但 日614—3—30和Hb14—3—3b的表达模式不 一 样 ．Hb14—3—30在树皮 中表达量最高，而 Hb14—3—3b在叶中表达量最高 。 关键词 巴西橡胶树 ：14—3—3蛋 白：表达分析 doi 10．39696．issn．1000-2561．2010．09．004 中图分类号 $794．1 14—3—3蛋白于1967年发现存在于人脑中．很长一段时间被认为是脑特异蛋 白、它是经二乙氨 乙基纤 维素柱层析后分离组分的片段数 目和淀粉凝胶电泳中迁移的位置而命名 的lJ【。20世纪 9O年代在植物中发 现了 l4—3—3蛋白，后来发现其广泛分布于哺乳动物、两栖类 、昆虫、植物和酵母菌等真核生物中嘲。 l4—3—3蛋 白家族虽在序列上高度保守，但不同物种、同一物种中不同14—3—3蛋 白成员的N端和 C 端均存在差异 。由于 N端和 C端的差异 ．14—3—3蛋白家族中的不同成员行使不 同的功能I3】。14—3—3蛋自 主要 以同源或异源二 聚体形式存在 ．可 以同时与两个靶蛋 白或者与一个靶蛋 白的两个结构域相互作用 ． 通过与靶蛋 白上一小段共有序列 的磷酸化丝氨酸／苏氨酸残基结合来发挥其调控功能4J【 14—3—3蛋 白在调 控植物基础代谢 中处于中心地位 ．通过与硝酸还原酶 、蔗糖磷酸合成酶 、叶绿体前体蛋 白等的相互作用 来调控糖 、氨基酸、核酸和蛋白质等物质的生物合成 ；14—3—3蛋白通过直接蛋 白质一蛋 白质相互作用对植 物代谢关键酶 、质膜 H十一ATP酶等发挥广泛调节作用5[-1o]。相关研究结果表明。14—3—3蛋白通过与转录因子 和其他信号分子结合参与调控植物细胞信号转导[10-13] 巴西橡胶树 (Heenbrasiliensis)自根幼态无性系是一种新型的橡胶种植材料 ，它生长速度快 、产胶量 高、抗逆性强[t4-1~。为探讨 自根幼态无性系高产的原因，本课题组通过抑制差减杂交获得 了一些在幼态 自 根无性系和老态无性系的胶乳中差异表达的片段 其中 1个片段长 170bp，BlastX分析表明，该片段编码 的氨基酸与木薯的 l4—3—3蛋白基因同源性达到了89．4 本研究在此基础上通过 RACE技术获得 了巴西 橡胶树的 14—3—3蛋白基因(命名为Hb14—3—3o、日6l4—3—3b)，并对其表达进行了初步研究，为进一步了解 l4—3—3蛋白基因在植物中的生物学功能以及橡胶树 自根幼态无性系高产的分子机制奠定基础。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 植物材料 巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)7—33—97来 自中国热带农业科学院试验农场。胶乳的 基金项 目：国家 自然科学基金项 目，高等学校博士学科点专项科研基金 (20070565003)资助。 第一作者简介 ：李辉亮 ，男 ，1973年生 ，博士。研究方 向：植物分子生物学。 }通讯作者 ．彭世清。E-mail：shqpeng@163．com。 收稿 13期 ：2010—08—03 修回 日期 ：2010—09—06 9期 李辉亮等