不同来源的5株新城疫病毒的分离·鉴定与基因型分析.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2010，38(29)：16245—16247，16258 责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲 不 同来源的5株新城疫病毒的分离 ·鉴定与基 因型分析 黄银云 (江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州2253)(0) 摘要 [目的]分离鉴定不同来源的5株新城疫病毒 (NDV)，并对其基 因型进行分析。[方法],gk2r-苏和广西发病孔雀、鸡、鹅群分离到5 株NDV。参照文献合成 l对引物P和P，用于扩增基质蛋白基因(M)1161nt至融合蛋 白基因(F)889nt之 间长约970nt的片段。用 TrizolRNA试剂盒抽提 5株NDV基因组，再按照Pronlega说明书，用上游引物P 合成 F基因cDNA，合成的cDNA作为聚合酶链式反应 (PCR)的扩增模板，用PCR反应扩增 F基因目的片段。将所得产物进行序列测定，获得这 5株 NDVF基因5端约899．nt序列。采用 DNAMAN软件对 F基因47～420nt间的片段进行序列分析，并推导出相应的氨基酸序列。在此基础上，从GenBank中选取32个参考毒 株与这5个分离株进行遗传变异分析 ，并绘制系统发育进化树。[结果]同源性分析比较表明，5株NDV分离株之间的差异性很小，它们 之间的同源性为95．0o％～97．00％，其 中2株广西分离株之间的同源性为97．07％，3株鹅源分离株之间的同源性为96．43％。所有毒株 F蛋白裂解区氨基酸序列均为 “R—R—Q—K—R—F117，符合强毒株裂解区住点特征。这 5株 NDV分离株均属于基 因Ⅶ型和VIId亚型。 结『 论 f近几年流行的NDV的主导基 因型为基因Ⅶ型 ，且来 自不同宿主的毒株之间的差异性较小 关键词 新城疫病毒；分离；鉴定；基因Ⅶ型 中图分类号 S851．313 文献标识码 A 文章编号 O517—661l(2010)29—16245—03 ． IsolationandIdentification ofNewcastleDiseaseVirusesfrom DifferentSpeciesand AnalysisofTheirGenotype HUANGYin-yun (JiangsuAnimalHusbandry．andVeterina~ProfessionalCollege，Taizhou，Jiangsu225300) Abstract iObjectiveITheresearchaimedtoisolateandidentifytheNewcastlediseaseviruses(NDV)from differentspeciesandanalyze theirgenotype．[Method]FiveNDVisolateswereisolatedfromvisceralorgansofdiseasedbirdsduringoutbreaksofchickens，geeseandpea— fowlinrecentyearsinJiangsuandGuangxiProvinces．Onepairofprimer，PlandP2，composedbyaccordingtorefereneewereusedtoamplify about970ntrfagmentfrommatrixprotein(M)gene1161nttOfusionprotein(F)gene889nt．FiveNDV isolatesgenomewereextractedby TrizolRNA kit，cDNA ofFgenecomposedbyusingPlwasusedastemplateofPCR toamplifythetargetrfagmentofFgene．Theproductse— queneingwasdeterminedandobtainedabout890ntsequenceattim 5teurfina1of5NDV isolatesFgene．374ntsequenceanalysisbetween47 to420ntwasmadebyDNAMAN soft．anddeducedcorrespondingaminoacidsequence．A phylogenictreewasconsturctedbasedonthe374 ntsequencedataof5NDV isolatesand32NDVreferencestrainsrfom theGenbank．jResu