甲基强的松龙对脊髓损伤大鼠下丘脑视上核FOS、NOS表达的影响.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 35期 甲基强的松龙对脊髓损伤大 鼠下丘脑视上核 FOS、NOS表达的影响 李雪甫 ，傅玉峰 ，王永实 ，陈 培 ，丁 炯 ，肖 明 (1淮阴卫生高等职业技术学校，江苏淮安 223300；2南京医科大学人体解剖教研室) 摘要：目的 观察甲基强的松龙 (MP)对急性脊髓损伤 (SCI)后下丘脑视上核神经元原癌基因FOS和一氧化氮 合酶 (NOS)表达的影响。方法 将 12只SD大 鼠随机分为治疗组、损伤组 、对照组各4只，治疗组、损伤组均制备 SCI模型且切断脊髓 ，对照组为假手术组 ，治疗组术后立即静注MP30mg／kg，损伤组和对照组静注相同剂量的生理 盐水，三组均持续4周。采用免疫组化法检测各组 1d、1周、4周视上核神经元 FOS的表达；采用还原型尼克酰胺 腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH—d)组织化学法检测 NOS表达。结果 损伤组 1dFOS、NOS阳性细胞数明显高于 对照组，治疗组 1、4周的FOS、NOS阳性细胞数明显低于损伤组 (P均0．05)。结论 MP可能对 SCI后下丘脑视 上核内神经元继发性损伤有一定保护作用。 关键词：甲基强的松龙；脊髓损伤；视上核；原癌基因FOS；一氧化氮合酶 中图分类号：R651．2 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)35-00394)2 脊髓损伤(SCI)不仅引起损伤局部神经组织变 过夜。Leica恒冷箱冰冻切片机连续切片，片厚 30 性坏死、空洞形成和胶质瘢痕形成 ，还可累及传导 m，隔5张取 2张，分 2套收集于 0．01mol／LPBS 束，导致脑内运动 中枢和 内脏心血管活动核团内神 内。一套行 尼 氏染 色进行核 团定位 ；另一套行 经元萎缩、变性坏死，造成继发性损伤与 内脏、心血 NADPH—d组织化学及 FOS免疫组织化学染色_5J。 管功能紊乱 ¨J。2009年 1O月 ～2010年 10月，我们 切片在反应液 [0．1mol／LPB(pH8．0)，含 0．3％ 观察了甲基强的松龙 (MP)对急性脊髓损伤 (SCI) TritonX一100，0．6g／LNBT，0．5 LB．NADPHI中37 大鼠下丘脑视上核神经元 FOS和一氧化氮合酶 ℃避光孵育 1h，0．01mol／LPBS充分洗涤，置入含 (NOS)表达的影响，旨在为SCI临床治疗提供理论 兔抗大鼠FOS(1：3000)0．O1mol／L，pH7．4PBS中 依据 。 37cC孵育2h；漂洗后 ，入含生物素标记的羊抗兔 1 材料与方法 IgG液 (1：100)，37℃孵育 30rain；反复漂洗后 ，行 1．1 材料 SD大鼠l2只(南京医科大学动物中心 ABC法显色 ，0．01mol／LPBS终止反应。贴片、风 提供)，雌雄不限，体质量200～300g。将 l2只sD 干、脱水、透明、封片。另选 1只正常大鼠，灌注后取 大鼠随机分为治疗组、损伤组、对照组各4只。主要 脑、切片，取含下丘脑视上核的切片，行免疫组化空 试剂：硝基 四氮唑蓝 (NBT，美 国Sigma公 司)；8一 白对照试验。图像分析和数据处理：根据 Paxino和 NADPH(美国Sigma公司)；兔抗大 鼠FOS(美 国Sig． Watson大鼠脑 图谱对尼 氏染色切片上的下丘脑视 1na公司)；含生物素标记的羊抗兔 IgG(武汉博士德 上核进行定位，以确定该核团的主部。用 Leica图 公司)。 像分析系统对相应的FOS免疫组化和NADPH．d组 1．2 实验方法 织化学染色切片进行显微摄像 ；每只大 鼠统计 4张 1．2．1 模型制备及干预 治疗组和损伤组采用横 切片，计数核团的主部FOS阳性细胞和NOS阳性神 断法制作 SCI模型 “J，对照组为假手术组，治疗组 经元数 目。FOS阳性细胞为细胞核着