应用巢式PCR-DGGE技术分析稻虱缨小蜂体内Wolbachia的多样性.pdfVIP

昆虫 学 报 ActaEntomologicaSinica，December2011，54(12)：1354—1360 ISSN0454-6296 应用巢式 PCR．DGGE技术分析稻虱缨小蜂体 内 Wolbachia的多样性 刘淑平 ， ，王 新 ，徐红星 ，汤江武 ，郑许松 ，杨亚军 ，吕仲贤 (1．浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所，杭州310021；2．杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州310036) 摘要：以采集 自中国杭州和菲律宾的稻虱缨小蜂Anagrusnilaparvatae为研究对象，采用巢式PCR扩增Wolbachia 的16SrDNA和wsp基因片段，并用DGGE分析稻虱缨小蜂体内Wolbachia的多样性。基于 16SrDNA基因的分析 结果准确地检测到稻虱缨小蜂体内细菌主要是Acinetobactersp．，Methylophilussp．，Acidovoraxsp．，Burkholderiasp．和 ％f6nc^ sp．。基于wsp基因的分析结果显示，杭州种群感染的Wolbachia属于A组的Mors亚组 ，菲律宾种群感 染的Wolbachia属于A组的Dro亚组。结果说明，巢式PCR．DGGE是寄生蜂体内Wolbachia检测和多样性分析的有 效方法，其中16SrDNA基因是检测Wolbachia存在的较佳分子标记，wsp基因是Wolbachia多样性分析以及种属鉴 定和分型的较佳分子标记。 关键词：稻虱缨小蜂；Wolbachia；多样性；16SrDNA基因；wsp基因；PCR-DGGE 中图分类号 ：Q965．8 文献标识码：A 文章编号：0454-6296(2011)12—1354-07 Diversity of Wolbachia in Anagrus nilaparvatae (Hymenoptera： Mymaridae)analyzedusingnestedPCR．DGGE LIUShu—Ping ，WANGXin ，XU Hong-Xing ，TANGJiang—Wu ，ZHENG Xu-Song ，YANG Ya· Jun。 Lf0Zhong—Xian (1．InstituteofPlantProtectionandMicrobiology，ZhejiangAcademyof ， AgriculturalSciences，Hangzhou310021，China；2．SchoolofLifeandEnvironmentScience，Hangzhou NormalUniversity，Hangzhou310036，China) Abstract：TheobjectiveofthisresearchistoanalyzethediversityofWolbachiaininsectsbyusingnested PCR—DGGE．SamplesofAnagrusnilaparvatae，oneofdominanteggparasitoidsofriceplanthoppersin Asianricegrowtharea，werecollectedfrom Hangzhou，ChinaandthePhilippines．AfterthetotalDNA wasextracted，the16SrDNA andwsp genefragmentsofWolbachiawereamplifiedwithnestedPCR，and thenanalyzedusingDGGE．TheresultsshowedthatWolbachiainA．nilaparvataeweresensitivelyand exactlydetected based on 16S rDNA gene，and the dominantbacteria in A． nilaparvatae were Acinetobactersp．，Methylophilussp．，Acidovoraxsp．，Burkholderiasp．andWolbachiasp．Theanalysisof wspgeneshowedthatWolbachiainA．nilaparvataefrom Hangzhou