小鼠β防御素2在MDCK细胞中的表达和抗流感病毒活性研究.pdfVIP

中国人兽共患病学报 792 ChineseJournalofZoonoses 2011，27 (9) 文章编号：1002—2694(2011)09—0792—04 小鼠P防御素2在MDCK细胞中的表达 和抗流感病毒活性研究* 巩天祥 ，冯 伟 ，李婉宜。，张 强。，戴 军 ，裴德翠。，蒋忠华 ，李明远。 摘 要：目的 探索小鼠p防御素 2(mousep—defensin2，mBD2)表达载体在狗肾传代细胞 (Madin-Darbycaninekidney， MDCK)中的表达和抗 甲型流感病毒(influenzaAvirus，IAV)活性。方法 将真核表达载体 pcDNA3．1／mBD2利用脂质体法 转染MDCK细胞，G 筛选得到稳定转染的阳性细胞，用RT—PCR方法鉴定 目的基因和免疫荧光法鉴定 目的蛋 白在转染细胞 中的表达。用TCID。测定转染细胞的抗 IAV活性。用 pcDNA3．1／mBD2质粒免疫小鼠，观察死亡保护率。结果 pcDNA 3．1／mBD2转染MDCK细胞后在细胞中稳定表达，转染细胞的TCID。比对照组的病毒效价降低近 77．98倍；重组质粒免疫小 鼠后，死亡保护率为 55．55％。结论 mBD2能够在 MDCK细胞中稳定表达，并且在体外及体 内实验中显示出抗流感病毒活 性，该结果为抗流感病毒制剂研究奠定了实验基础。 关键词：小鼠B防御素2；表达载体；甲型流感病毒 中图分类号 ：R373．1 文献标识码 ：A Expressiononmousep-defensin2 inMDCK anditsactivityagainstinfluenzaA virus GONGTian—xiang，FENGW ei，LIWan—yi，ZHANGQiang，DAIJun， PEIDe—cui，JIANG Zhong—hua，LIM ing—yuan (ChenduBloodCenter，Chengdu610041，China) ABSTRACT：TheobjectiveofthispaperistostudytheexpressionofmBD2inMDCK cellanditsactivityforagainstIAV． TheestablishedeukaryoticexpressingplasmidpcDNA3．1／mBD2wastransfectedintoMDCKcellbyPolyFecttransfectionRea— gent．ThepositiveclonewithpcDNA3．1／mBD2wasscreeningwithG4l8．Expressionoftargetgeneandpeptideintransfected cellswasdetectedwithRT_PCR andtheimmunofluorescenceassays。respectively．Theactivityofanti—IAV oftransfectedcells wasmeasuredwithTCID5o．Additionally，pcDNA3．1／mBD2wasinjectedintomicetoobserveitseffectagainstIAV invivo． TheresultsshowedthatpcDNA3．1／mBD2plasmidwastransfectedsuccessfullyandexpressedstablyinMDCK．TheTCID5o ontransfectedcellsdecreased77．98timescomparedwithcontro1group，andithaddistinctdifferencebetweentheexperiment andcontrolgroups(PO．05)．TheprotectionrateforthemiceimmunedwithpcDNA3．1／mBD2afterchallengedwithlethal IAV was55．55 ．TheseresultssuggestedmBD2hasacl