实时荧光RT-PCR检测凝血块中乙脑病毒RNA.pdfVIP

中 国人兽共 患病 学报 ChineseJournalofZoonoses 787 文章编号 ：1002—2694(2011)09—787—05 实时荧光RT—PCR检测凝血块中乙脑病毒RNA* 张拥军 。，王金章 ，朱莉莉 ，陈 端 ，陈 炜 摘 要 ：目的 探索建立灵敏便捷的乙脑病毒核酸检测方法，为临床疑似 乙脑病例提供可靠辅助诊断依据 。方法 采用 基于 SYBRGreenI染料的实时荧光RT_PCR方法，对一系列乙脑病毒检测引物进行综合评价，并应用于部分临床确诊或疑 似乙脑病例血清和凝血块中病毒核酸检测。结果 根据 9对引物检测连续稀释病毒RNA 的扩增 曲线和融解 曲线，筛选出 1 对灵敏度和特异性较好的引物。该体系分别检测 15份乙脑病毒IgM 阳性和 15份 IgM 阴性患者的血清和凝血块中提取的核 酸，血清样品全部为阴性，而凝血块样品发现 7份核酸阳性。结论 从患者凝血块中提取核酸样品，可以用于JEV感染的实 验室诊断。在我们建立的乙脑病毒核酸实时荧光PCR检测体系中，首次发现凝血块样品比血清样品灵敏度更高，说明凝血块 用于病毒性脑炎实验室诊断具有重要价值 。 关键词 ：实时荧光 PCR；乙型脑炎病毒；凝血块 中图分类号：R512．87 文献标识码 ：A DetectionofJapaneseencephalitisvirusRNA from bloodclotsbyreal-timeRT-PCR ZHANGYong—jun，WANGJin—zhang，ZHU Li—li，CHENDuan，CHEN Wei (F ianCenterforDiseaseControlandPrevention，Fuzhou350001，China) ABSTRACT：Japaneseencephalitisvirus(JEV)commonlycausessevereviralencephalitiswithhighmortalityandmorbidity amongchildreninAsia．Moresensitive，rapidandsimpleviralRNA assaysarerequiredforreliablelaboratorydiagnosisofclin- icallysuspectedJapaneseencephalitiscases．Inthisstudy，anoptimizedprimerpairwereselectedamongavarietyofamplifiers afterevaluationwithSYBR GreenI-basedonestepreal—timeRT—PCR．Detectionofnucleicacidspecimensextractedfrom both seraandbloodclotsof15confirmedand15suspectedJEcasesrevealednopositivesamplesfrom sera，incontrasttOsevenposi— tivefrom bloodclots．Theseresultsindicated，forthefirsttime，thatbloodctotsweremoresensitivethanserainthisSYBR GreenI-basedreal—timePCR system forJEV RNA，suggestingbloodclotswouldbevaluablespecimensourcesforlaboratory diagnosisofviralencephalitis． KEYWORDS：real—timePCR；Japaneseencephalitisvirus；bloodclots 流行性 乙型脑炎(简称乙脑)是一种经蚊传播的 尽管人类作为 JEV传播链中的终末宿主，病毒 人兽共患病 ，主要流行于东南亚及澳洲一些国家和 血症期 比较短暂，且病毒载量较低 ，从患者组织、血 地区。以严重的脑炎和神经疾病为特征 ，病死率和 液或其它体液中检测JEV特异 RNA依然是实验室 致残率 高。其致病