禽结核病实验室诊断研究进展.pdfVIP

畜牧兽医 唼瞒防治 禽结核病实验 室诊断研 究进展 张 雷 (辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 1lO164) 中图分类号 $858．3 文献标识码 A 文章编号 1672—9692(2012)12—0036—03 禽结核病 (Aviantuberculosis)，又称分支杆 的意义。选择分支杆菌的特定DNA序列进行扩 菌病 ，是 由禽结核分支杆菌 (Aiummycobacteri． 增，并进行 同源性分析，可对不同种属的分支杆 urn)引起的一种慢性传染病，一旦侵入鸡场可长 菌进行分类 、鉴定。李国利等川选择 了包括结核 期存在，主要侵害家禽、水禽、野生禽类和观赏 分支杆菌、牛分支杆菌、鸟分支杆菌等22种30 禽类等。临床特征主要表现为贫血、消瘦、鸡冠 株分支杆菌的16,~,23SrDNA内转录问隔区进行 萎缩、产蛋停止，甚至死亡。结核病灶多发生于 扩增，并进行了同源性分析，结果表明，该方法 肝、脾 、肠道、骨髓 、关节等。2008年新修订 能将分支杆菌鉴定到种的水平，可以将各分支杆 的 《我国法定一、二、三类动物疫病病种名录》 菌进行区分 。16423SrDNA内转录间隔区的核 将其列为三类动物疫病。做好禽结核病的实验室 苷酸序列长度较短，可以快速扩增全序列，该序 诊断对于防治该病具有重要的意义。 列含有足够的信息，可以将分支杆菌鉴定到种 1 病原学诊断 的水平，但是该方法需要积累大量的各分支杆 1．1 染色镜检 取病料进行涂片，进行抗酸性 菌的16~23SrDNA内转录间隔区信息进行分析 染色 (Acid—faststain)，如果检出大量的抗酸性 比较。 细菌，结合临床症状可初步诊断，进一步确诊需 1．4 限制性片段长度多态性 限制性片段长度 要进行其他试验。此种方法的检出率一般不会太 多 态 性 (RestrictionFragmentLengthPolymor． 高 (约60％)。 phism，RFLP)是结核病诊断应用比较早的DNA 1．2 病原分离 取病料接种培养基 ，肝和脾是 指纹图谱方法之～，近些年也越来越多地应用到 最好的分离病料。培养基中一般需要添加蛋黄、 结核病的流行病学调查上，该方法具有重复性和 全蛋、甘油、分支菌素等促进分支杆菌生长的物 特异性强的优点，其操作过程基本上是在培养基 质，常用的培养基有Petragnane培养基、添加 1％ 上培养 ，经裂解细菌后获得大量DNA，然后用 丙酮酸钠 Lowenstein—Jensen，Herrold氏培养基 、 切割点较少的限制性内切酶裂解，产生小数量的 Midddlebrook氏7H10培养基等。初次分离可添加 大片段，通过脉冲场凝胶电泳后分析各酶切片段 5％～10％CO，37℃培养至少持续8周，最长2 图谱来分析菌株间的同源性等方面的关系。但这 个多月。日前在结核分支杆菌的分离培养上采用 一 方法要求进行细菌体外培养约3～4周，提取 了一一些先进的仪器，如BACTEC460、分支杆菌 大量的DNA，结果导致检测周期过长 ，其次指 生长指示管法 (MGIT法)、 自动连续监测系统 纹翻译和匹配复杂，并要求复杂的计算机软件进 等，这些仪器是采用放射性同位素技术或荧光计 行大量的分析。国际上推荐的结核分支杆菌复合 量技术来实施监测分支杆菌的生长，使得检测时 群 的分型方法采用 的有 IS6110一RFLP等 ，Su— 间比传统方法大大缩短，阳性率也有所提高。禽 jeetKumarl利 用 IS1245一RFLP方 法 和 针 对 结核分支杆菌也可以采用这些仪器来进行体外培 IS1245、ISI3ll的PCR方法对从 印度H1V／AIDS 养。 病人分离出的65株禽分支杆菌群 (MAC)菌株 1．3 PCR方法 对于分支杆菌这类生长缓慢 的 进行多态性分析 ，认为84．6％的菌株能利用 病原，能够采用PCR等快速的检测方法具有重要 IS1245一RFLP