降低西瓜试管苗玻璃化因素的优化.pdfVIP

第 31卷第 1O期 西 南 大 学 学 报 (自然科学gt) 2009年1O月 Vo1．31 NO．10 JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition) Oct． 2009 文章编号 ：1673—9868(2009)10—0035—04 降低西瓜试管苗玻璃化因素的优化 余彭娜 ， 周启贵 ， 龙 云。， 汤绍虎 1．黔南 民族师范学院生命科学系，贵州 都匀 558000；2．西南大学 生命科学学院，重庆 400715 摘要：以西瓜为材料，采用L。(3”)多因素正交设计 ，研究不同的基 因型材料、培养温度 、光照强度 、培养基 中BA、 琼脂、蔗糖、IAA和Phi．浓度对试管苗玻璃化的影响．结果表 明：培养温度 的影响达极显著水平(户O．01)，玻璃化 频率 15℃35℃25℃，15℃与 25℃、35℃间差异显著(户O．05)；材料的基因型、光照强度 、培养基 中BA、 琼脂和蔗糖浓度的影响达显著水平 ，玻璃化频率 2n3n4n，4n与 2n、3n间差异显著；1000Lx2000Lx 3000Lx，1000Lx与2000、3000Lx间差异显著；BA4mg／L~2mg／L~1mg／L，1mg／L与2mg／L、4mg／L间 差异显著 ；琼脂 5g／L8g／L 11g／L，5g／L与8g／L、11g／L间差异显著；蔗糖 10g／L~30g／L50g／L， 10g／L与30g／L、50g／L间差异显著．在继代培养 中，降低试管苗玻璃化的综合措施是：培养温度 25～35℃，光 照强度 2000~3000Lx，培养基中BA≤1mg／L，IAA≥1mg／L，Ph1．≥2g／L，琼脂 8～11g／L，蔗糖 30~50g／L． 关 键 词 ：西瓜 ；组织培养；玻璃化 ；正交设计 中图分类号 ：s651；Q945．51 文献标识码 ：A 西瓜是人们熟知的水果 ，无籽西瓜是水果珍品．西瓜 ，尤其是无籽西瓜制种过程复杂，成本高，种子发 芽成苗率低口]，故西瓜的组培快繁备受关注 ．但与其它许多植物一样，西瓜试管苗也易发生玻璃 化 ’3-6]．玻璃苗是半透明状的畸形试管苗，由于其组织结构和生理功能异常，故成株能力低，难以分化、 增殖、生根和移栽成活，已成为组培工作中亟待解决的一大难题 ．自1981年Debergh等 首先提出试管 植物的玻璃化概念并做了较系统研究 以来 ，关于试管苗玻璃化 问题的研究引起了人们的高度重视 ’ “， 但对其形成的根本原因还不清楚u ，已有 的研究报道不仅参试因数较少，而且缺乏对试验结果的定量分 析．本文采用正交设计法研究了培养温度等 8个因子对西瓜试管苗玻璃化频率的影响，并在统计分析的基 础上提出了降低西瓜试管苗玻璃化的综合措施． 1 材料与方法 试验材料为西瓜 (Citrulluslanatus(Thunb．)Mansf．)，品种为 郑‘抗一号’(2n)、 郑‘抗无籽一号 ’(3n) 和 ‘四倍体一号’(4n)(均 由中国农科院郑州果树所选育)．种子用温水浸泡 3h，常规表面消毒，去种皮后接 种在 MS琼脂培养基中，于(28±1)℃萌发培育无菌苗．剪取无菌苗的带子叶枝端，转入丛芽诱导培养基 MS+2mg／LBA中(含8g／L琼脂 、30g／L蔗糖，pH一5．8)，于 (25±1)℃、2000Lx光照培养诱导丛芽． 在无菌条件下，切取第 1代丛芽中生长 (长度、粗细)一致的单芽作为接种的外植体．采用 8因素 3水平正 交设计，正交表选用 Lz(3¨)u ，表头设计见表 1．所用基本培养基均为MS，pH一5．8；培养基用 100mL 三角瓶分装 (每瓶 3OmL)，每个处理接种单芽40个(4个 ／瓶)，植物组培专用封 口膜封 口．在不同的培养基和 培养条件下，培养30d后统计试管苗 (无根苗)的玻璃化频率 ，利用 SPSS12．0软件对试验结果进行统计分析． 收稿 日期 ：2009—04一O8 基金项 目：重庆市自然科学基金资助项 目(CSTC，2005BB1058)；西南大学博士基金资助项 目(SWNUB2005042) 作者简介：余彭娜 (1956一)，女，贵州贵阳人，副教授，主要从事生物学教学论和植物生理研究． 通讯作者 ：汤绍虎 ，教授． 36 西南大学学报 (自然科 学版)