金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒作用研究.pdfVIP

· 48 · ACTAUNIVEKSITATISTR．ADITIONISMEDICALISSINENSIS SHANGHAIVo1 ． 23No．6Nov．，2009 金欣 口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒作用研究 白凌军 、‘ 白凌鹰 汪受传 徐建亚 1．南京中医药大学 (江苏 南京 210029) 2．南京康海药业研发部 (江苏 南京 210061) 【摘 要】 目的：观察金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人喉癌上皮细胞(Hep．2)细胞的抑制 作用。方法：通过体外抗病毒实验采用MTY法检测病变抑制率及以上清滴度观察金欣 口服液含药血清对 RSV的抑制作用。结果：MTI法测定病毒抑制率均高于75％，含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对 照组比较有显著差异，滴度低于后两组。结论：金欣 口服液对呼吸道合胞病毒引起的细胞病变有明显抑制 作用。 【关键词】 呼吸道合胞病毒；金欣口服液；含药血清；抑制作用 【中图分类号】 R285．5 【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X(2009)05-0048-03 金欣口服液是著名儿科专家汪受传教授的经验 定 通法…取含药兔血清 一70％真空冷冻干燥成粉 方，由炙麻黄、杏仁、黄芩、葶苈子、前胡、虎杖等8味 末，一20~C保存备用。用细胞维持液将含药兔血清 中药组成，主治痰热闭肺证小儿病毒性肺炎，临床疗 冻干粉按倍比稀释，加至已长成单层的细胞培养板 效显著。本实验通过体外实验观察金欣 口服液对呼 上，每个稀释度做 4个复孔，并设正常细胞对照孔， 吸道合胞病毒抑制作用。 37~C5％CO 培养箱 中培养，每Et观察细胞生长情 况，连续观察 3d，以不出现细胞病变的最高浓度为 1 材料与方法 无毒界线。 I．1 实验材料 新西兰大 白兔，雌性，健康无病，体 1．3 呼吸道合胞病毒A、B亚型组织培养半数感染 重2—2．5kg，由江宁县汤山青龙山动物繁殖场提 量(TCID轴)的测定 以1X10／ml浓度的Hep-2细 供，许可证号：SCXK(苏)2005--0009；Hep-2(人喉癌 胞接种96孔细胞板，每孔 100 l。病毒悬液用不完 上皮细胞)，由凯基生物科技发展有限公司提供；呼 全培养基 l0倍稀释 8个浓度 。在接种细胞后 18～ 吸道合胞病毒 (RSV)A亚型 (Long株)、B亚型 (R6 36h内，细胞长成单层时吸弃培养液，PBS洗细胞 株)，由广州博特生物工程有限责任公司提供；金欣 面，接种各稀释度的病毒液，每个稀释度接种 5孔， 口服液(1．351g／m1)，由南京中医药大学植物药与 每孔5O ，并设正常细胞对照组。置 37℃、5％CO 新药开发研究中心负责制剂和质控；利巴韦林注射 培养箱中吸附1．5h。吸弃病毒液，每孔加入维持液 液，上海现代哈森药业有 限公 司提供 (批 号： i00 1，置培养箱中培养，逐 日观察病变。 ；新生牛血清，杭州 四季青公司提供 ； 以最高稀释度不再出现新病变时为终点，用 DMEM培养基，美 国GIBCO公司；MTY，美 国Sigma Reed．Muench法计算TCID ． 公司：二甲基亚砜 (DMSO)，美国AMRESCO；胰酶， 1．4 含药血清对 RSV的直接抑制作用 将 1X 美国AMRESCO公司；酶联免疫检测仪 ELX800，美 10／ml浓度的Hep．2细胞接种到96孔培养板上，置 国BioTek。 37℃、5％CO：箱培养。待细胞长成单层 (在 18～36h 1．2 含药血清和利巴韦林对细胞最大无毒浓度测 内)，取 100TCID5oRSVA亚型50 或 10