七种中成药微生物限度检查方法验证.pdfVIP

2009年 10月 中成 药 October20o9 第31卷 第 1O期 ChineseTraditionalPatentMedicine V01．31 No．10 七种 中成药微生物限度检查方法验证 张国柱， 胡华利， 王 易， 丁 伟， 李晓玲 (陕西省汉中市药品检验所，陕西 汉中723000) 关键词：微生物限度检查；验证；抑菌作用 中图分类号：11927．33 文献标识码：B 文章编号：1001．1528(2009)10．1630-03 药品微生物限度检验方法的验证是现代质量保证体系 2．1．1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢菌的新鲜 中关系到质检技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成 培养物接种于肉汤培养基 中，35℃培养 18～24h，用0．9％ 部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。由于某些 氯化钠溶液 l0倍稀释制成50—100cfu／mL的菌悬液。 供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条 2．1．2 白色念珠菌的新鲜培养物接种于改良马丁液体培养 件发生改变时，可能影响检验结果的准确性 ，所以 《中国药 基中，25℃培养24—48h，用0．9％氯化钠溶液 l0倍稀释制 典2005年版要求药品微生物限度检查必须进行方法学验 成50～100efu／mL的菌悬液。 证，以保证对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。 2．1．3 25℃培养一周黑曲霉斜面培养物，加 0．9％氯化钠 本试验选用的7种中成药微生物限度检查方法的验证 溶液3—5mL，洗下孢子转移至另一空管，标准 比浊后 ，用 是按照药典规定的要求，通过人工污染 5种致病菌：金黄色 0．9％氯化钠溶液 l0倍稀释制成50—100efu／mL的孢子茵 葡萄球菌，大肠埃希菌，枯草芽孢杆菌，白色念珠菌，黑曲霉 悬液。 菌，对其回收率进行逐一验证 ，从而建立了7种中成药的微 2．2 供试液制备 取样品10g，加稀释液 100mL，制成 1： 生物限度检查方法。 l0的供试液。 1 实验材料 2．3 验证方法 1．1 供试品 乙肝扶正胶囊，批号060201；胃炎康胶囊 ，批 2．3．1 常规法 取 1：10供试液 1mL，分别人工污染上述5 号060901；宫炎康胶囊，批号 060401；止痢宁片，批号 种代表试验菌株50—100cfu，立即倾注 15—20mL琼脂培养 060301；骨筋 丸胶囊，批 号 060801；复方丹参 片，批 号 基，平行制备两个平皿，待凝固置规定温度培养24—72h观 061201；三黄片，批号070401；以上7种药品均为陕西白云制 察结果，计算菌落数作为试验组，同法测定相应加入的试验 药厂供样。 菌数作菌液组 ，测定供试品本底菌数作为供试品对照组。 1．2 菌种 大肠 埃希菌 (Eseheriehiacoli)[CMCC(B) 2．3．2 培养基稀释法 采用 0．2mL／~1．的供试液，加入 15 44102]；金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B) — 20mL营养琼脂培养基培养 ，做菌数计数。 26003]；枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)[c~cc(B)63501]； 2．3．3 低速离心+培养基稀释法 取 1：10的供试液 10mL 黑曲霉菌(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]；白色念珠菌 于500r／min离心5min，取上清液，用稀释剂补足 10mL，采 (Candidaalbicans)[CMCC(F)98001](均由中国医学细菌保 用0．1mI／皿，加入试验菌金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 藏中心提供)。