硝基精氨酸手性转化和立体选择性代谢的关系.pdfVIP

上海交通大学博士学位论文 第五章 硝基精氨酸手性转化和立体选择性代谢的关系 手性药物在体内代谢的过程中 不同的异构体会在体内分布 体内代谢 转运速 度 蛋白结合率及清除速率方面存在差异 大量的文献表明氨基酸类化合物在药物代 谢动力学过程中表现出立体选择性 作为天然氨基酸 精氨酸的衍生物 硝基精氨 酸的单向手性转化预示着该化合物体内代谢异构体选择性差异的存在 Wang 等在麻 醉大鼠体内证实了这种差异的存在 Wang et al., 1999 但是因为麻醉状态下动物 对药物的代谢与正常状态时不甚相同 为此本文将应用清醒大鼠考察体内硝基精氨酸 的手性药代动力学 另一方面 虽然苯丙氨酸在人体内(Lehamann et al., 1983)和亮氨酸在大鼠体内 (Hasegawa et al., 2000)的单向手性转化和药动学立体选择性差异先后被证实 但是对 于氨基酸手性转化与异构体代谢差异之间的关系一直无研究探讨 本文也对硝基精氨 酸手性转化和代谢动力学的关系进行了研究 在前期实验考察D 型氨基酸氧化酶 D-amino acid oxidase, DAAO 在D-硝基精 G 氨酸(N -nitro-D- arginine, D-NNA )手性转化中所起作用时 我们发现 DAAO 的选择 性抑制剂苯甲酸钠 400 mg/kg 可完全消除大鼠对 D-NNA 在升压反应 但不影响 G 大鼠对L-硝基精氨酸(N -nitro-L-arginine, L-NNA )的升压反应 因此我们认为苯甲酸 钠可能影响了D-NNA 的手性转化 甚至代谢过程 利用苯甲酸钠可在体内有效抑制 DAAO 生物活性这一性质 本研究应用毛细管 电色谱 capillary electrochromatography, CEC 对苯甲酸钠在硝基精氨酸的手性转化 和代谢动力学的影响进行考察 希望能揭示硝基精氨酸单向手性转化和代谢立体选择 性差异之间的关系 - 66 - D-硝基精氨酸体内手性转化机制的研究 1 材料和方法 1.1药物和主要试剂 D-NNA ( 吉尔生化上海有限公司 上海) L-NNA和天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯 (aspartame) (Acros, 比利时) 其余试剂均为国产分析纯 D-NNA和L-NNA均溶解于5%的葡萄糖注射液 溶度分别为8 mg/ml和4 mg/ml 完全溶解需要至少20 min的超声 1.2仪器与设备 CEC 美国通微分析技术有限公司 C18反相毛细管柱 75×25 cmìm I.D. (上 海通微分析技术有限公司) 1.3动物 SD大鼠 250 ~300 g 购自中国科学院上海实验动物中心 1.4大鼠体内D-NNA的药代学实验 SD大鼠给予戊巴比妥钠(65 mg/kg, ip)麻醉 在左上缘大腹股沟切口 分离股静 脉 实施股静脉插管 聚乙烯PE50 管 美国Becton Dickinson公司 术 PE50管经 背部皮下从颈背部引出 将导管内充满肝素液 200 U/ml 缝合切口 术后大鼠 独笼饲养恢复24 h 插管大鼠随机分为四组 两组给予5%的葡萄糖注射液(4 ml/kg n = 10) 另外 两组给予苯甲酸钠 400 mg/kg, n = 10 20 min后 大鼠再分别给予D-NNA 32 mg/kg, n = 10 或L-NNA 16 mg/kg, n = 10 所有的药物均通过插管给予 每次给药后给 予600 ìl的生理盐水 以确保在插管内无药物残留 随